科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如下，SLA-2基因長(zhǎng)度為1100bp,質(zhì)粒B的總長(zhǎng)度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離?？赡苡玫降南拗泼缸R(shí)別序列和切割位點(diǎn)如下表所示。
| 限制酶 |
BclⅠ |
NotⅠ |
XbaⅠ |
Sau3AⅠ |
| 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) |
T↓GATCA |
GC↓GGCCGC |
T↓CTAGA |
↓GATC |
（1）過(guò)程①中，PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是
DNA（半保留）復(fù)制
DNA（半保留）復(fù)制
，下列4種引物中應(yīng)選擇的是
引物a和引物b
引物a和引物b
。
引物a：5’-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物b：5’-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
引物c：5’-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物d：5’-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
（2）過(guò)程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是
擴(kuò)增重組質(zhì)粒
擴(kuò)增重組質(zhì)粒
，該過(guò)程需要用
Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有
氨芐青霉素
氨芐青霉素
（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用限制酶Sau3AⅠ和XbaⅠ完全切割質(zhì)粒B和質(zhì)粒C后電泳，請(qǐng)?jiān)趫D3中畫出預(yù)測(cè)的電泳結(jié)果
。
（4）科研中常用嘌呤霉素對(duì)真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，嘌呤霉素對(duì)細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為
80μg/mL
80μg/mL
，原因是
既讓沒(méi)有抗性的細(xì)胞死亡，又不會(huì)殺死有抗性的細(xì)胞
既讓沒(méi)有抗性的細(xì)胞死亡，又不會(huì)殺死有抗性的細(xì)胞
。
（5）篩選產(chǎn)SLA-2抗原肽的豬腎上皮細(xì)胞的方法是
用抗SLA-2抗原肽的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交法篩選
用抗SLA-2抗原肽的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交法篩選
。
【答案】DNA（半保留）復(fù)制；引物a和引物b；擴(kuò)增重組質(zhì)粒；Ca
2+；氨芐青霉素；
；80μg/mL；既讓沒(méi)有抗性的細(xì)胞死亡，又不會(huì)殺死有抗性的細(xì)胞；用抗SLA-2抗原肽的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交法篩選
