黃萎病是一種危害棉花的常見疾病，科學(xué)工作者通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將抗黃萎病基因——葡萄糖氧化酶基因（GO）導(dǎo)入棉花，獲得抗黃萎病棉花。下圖為構(gòu)建的重組質(zhì)粒的示意圖，已知T-DNA上的基因在農(nóng)桿菌中不能表達，而在植物細(xì)胞中能表達?；卮鹣铝袉栴}：
（1）構(gòu)建基因表達載體時，利用

限制酶和DNA連接

限制酶和DNA連接

酶將GO定向接入Ti質(zhì)粒。Ti質(zhì)粒上nptII的功能是

作為標(biāo)記基因，用于鑒別、篩選含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞

作為標(biāo)記基因，用于鑒別、篩選含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞

。
（2）在如圖所示重組質(zhì)粒中，目的基因的啟動子和終止子應(yīng)位于

GO的兩端

GO的兩端

（填“Bar的兩端”或“GO的兩端”或“Bar-GO的兩端”）。啟動子具有

驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄合成mRNA

驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄合成mRNA

的作用。
（3）切取經(jīng)無菌培養(yǎng)的棉花幼苗下胚軸，直接轉(zhuǎn)入含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌培養(yǎng)液中侵染5～10 min后，將下胚軸放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)2天。成功轉(zhuǎn)化的棉花細(xì)胞能在含有

草丁膦

草丁膦

的培養(yǎng)基中生長增殖，未成功轉(zhuǎn)化的細(xì)胞不能在該培養(yǎng)基中生長增殖。為了檢測轉(zhuǎn)基因棉花是否含有葡萄糖氧化酶，可采用

抗原一抗體雜交

抗原一抗體雜交

法進行檢測。
（4）若將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞，一般采用的方法是

顯微注射法

顯微注射法

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