20．四尾柵藻是一種淡水藻類，繁殖快、適應(yīng)性強(qiáng)，可作為制備生物柴油的重要原料之一。為提高四尾柵藻的油脂含量，研究人員將從含油量高的紫蘇中獲得的二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶基因DGAT1與pBI121質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)載體，經(jīng)轉(zhuǎn)化成功獲得高產(chǎn)油脂四尾柵藻，主要研究過程如圖，其中DGAT1-F（5′-GCATCTAGAATGGCGATCTTGGACTC-3′）和DGAT1-R（5′-CGGATCCCTACCTTGCACTAGCTTTTC-3′）是以DGAT1基因?yàn)橐罁?jù)設(shè)計(jì)的一對(duì)引物，LacZ基因編碼產(chǎn)物在X-gal和IPTG存在下，可以產(chǎn)生藍(lán)色沉淀，使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，否則菌落呈現(xiàn)白色。請(qǐng)回答下列問題：
| 限制酶識(shí)別序列及切制位點(diǎn) |
| BamHⅠ |
5′G↓GATCC3’ |
| SacⅠ |
5′GAGCT↓C3′ |
| XbaⅠ |
5′T↓CTAGA3′ |
| EcoRⅠ |
5′G↓AATTC3′ |
（1）過程①中需要的酶有
，過程②應(yīng)選用的限制酶是
和
。
（2）過程③經(jīng)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌通過
（方法）接種到培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。為篩選獲得目標(biāo)菌株，培養(yǎng)基應(yīng)加入的成分有
。
（3）用兩種限制酶切割DGAT1和pB1121，將其連接成重組表達(dá)載體，并將其導(dǎo)入四尾柵藻細(xì)胞中，與單酶切相比，雙切酶的優(yōu)點(diǎn)是
（答出兩點(diǎn)即可）。
（4）為檢測(cè)表達(dá)載體轉(zhuǎn)化四尾柵藻的情況及確定目的基因是否表達(dá)，研究人員進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)完成表格。
| 實(shí)驗(yàn)步驟 |
簡(jiǎn)要操作過程 |
| 初篩培養(yǎng) |
經(jīng)轉(zhuǎn)化后的四尾柵藻接種于含 的BG11固體培養(yǎng)基并放置于人工氣候箱培養(yǎng)，一段時(shí)間后觀察其生長(zhǎng)情況 |
|
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在BG11固體培養(yǎng)基上分別挑取數(shù)個(gè)單藻落接種至BG11液體培養(yǎng)基中光照搖床培養(yǎng)，編號(hào)備用 |
| PCR驗(yàn)證 |
收集四尾柵藻藻體，提取基因組DNA，以DGAT1-F和DGAT1-R為引物，進(jìn)行PCR驗(yàn)證，未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻作對(duì)照 |
| 油脂含量測(cè)定 |
利用索氏抽提法測(cè)定 的油脂含量 |
| 結(jié)果處理 |
統(tǒng)計(jì)并比較PCR驗(yàn)證結(jié)果及藻體中油脂的含量 |
