11.鹽脅迫會(huì)影響植物的生長,可用轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高植物的耐鹽能力。mybx是響應(yīng)鹽脅迫的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,其功能缺失突變體對(duì)150mmol?L-1的NaCl高度敏感。HKT1基因表達(dá)的Na+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)Na+從木質(zhì)部導(dǎo)管到木質(zhì)部薄壁細(xì)胞的運(yùn)輸,減少木質(zhì)部的Na+含量,從而提高植物的耐鹽能力??蒲腥藛T構(gòu)建HKT1基因的表達(dá)載體獲得HKT1基因表達(dá)菌體,構(gòu)建過程如圖所示。四種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示?;卮鹣铝袉栴}:
限制酶 |
HindⅢ |
BamHⅠ |
XhoⅠ |
BglⅡ |
識(shí)別序列及切割位點(diǎn) |
A↓AGCTT |
G↓GATCC |
C↓TCGAG |
A↓GATCT |
(1)將擬南芥細(xì)胞破碎提取RNA時(shí),需要在溶液中加入
,以防止RNA降解。過程③要選擇合適的限制酶切割含HKT1基因的DNA片段,應(yīng)選用的表中的限制酶是
。
(2)過程⑤將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌。在篩選含有HKT1基因的大腸桿菌時(shí),除必要的營養(yǎng)物質(zhì),還需要在培養(yǎng)基中添加
。提取重組質(zhì)粒A將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌,用農(nóng)桿菌侵染擬南芥mybz突變體花序,農(nóng)桿菌的作用是
。
(3)檢測(cè)轉(zhuǎn)HKT1基因擬南芥mybr突變株是否表達(dá)出Na
+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白時(shí),可用
技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。若Na
+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白高度表達(dá),還需要進(jìn)一步鑒定其抗性程度,實(shí)驗(yàn)的思路是
。