啟動子可分為組成型啟動子和誘導型啟動子。³⁵S啟動子是組成型啟動子，能夠持續(xù)、高效地啟動目的基因在植物各種組織中的表達，但往往也會阻礙植物的生長發(fā)育；Rd29A啟動子是一種逆境誘導型啟動子。沙冬青脫水素基因（AmDHN基因）能使植株具有較強的抗旱作用?？蒲腥藛T構建Rd29A啟動子驅動AmDHN基因表達的載體，過程如圖1。再利用農桿菌轉化法轉化“敖漢苜?！蹦秃敌缕贩N，以期在干旱地區(qū)發(fā)展苜蓿產業(yè)。

限制酶	BclⅠ	SacⅠ	BamHⅠ	PstⅠ	SmaⅠ
識別序列和切割位點	T↓GATCA	GAGCT↓C	G↓GATCC	CTGCA↓G	CCC↓GGG

回答下列問題：
?
（1）科研人員擴增Rd29A啟動子所設計的引物如下，根據(jù)引物的堿基序列及限制酶的識別序列分析，構建載體2時選用的限制酶是

SmaI和SacI

SmaI和SacI

。為了提高構建載體3的成功率，選用

BclI和SacI

BclI和SacI

酶切割載體1、2。
上游引物P1：5'-GACCCGGGTTTCCAAAGATTTTTTTC-3'
下游引物P2：5'-GAGAGCTCTGGGGTTTTGCTTTTGAATGT-3'
（2）載體5需先轉入

農桿菌

農桿菌

后再轉化苜蓿，轉化后應在培養(yǎng)基中添加

新霉素

新霉素

，以篩選轉化成功的愈傷組織。
（3）為檢測轉基因苜蓿中AmDHN基因的轉錄水平，挑選10株轉基因植株，利用自來水和20%PEG（模擬干旱條件）處理8h,提取RNA通過RT-PCR檢測AmDHN基因和MtActin基因（一種骨架蛋白基因）的表達水平，其結果如圖2：
①選擇MtActin基因轉錄水平作為參照的依據(jù)是MtActin基因在各細胞中表達

相對恒定

相對恒定

。
12345123AmDHN②自來水處理和20%PEG條件下的AmDHN基因表達水平的差異說明：

干旱能誘導Rd29A啟動子啟動轉錄

干旱能誘導Rd29A啟動子啟動轉錄

。