科研小組利用基因工程技術(shù)將“抗蟲基因”轉(zhuǎn)入棉花細胞成功培育出抗蟲棉，該技術(shù)所用的含“抗蟲基因”的DNA與質(zhì)粒上相關(guān)限制酶的酶切位點分別如圖1、圖2所示（不同限制酶的識別序列和酶切位點：BamHⅠ5'-G^↓GATCC-3'，BclⅠ5'-T^↓GATCA-3'，Sau3AⅠ5'-^↓GATC-3'，HindⅢ5'-A^↓AGCTT-3'）。請分析并回答以下問題：

（1）將抗蟲基因轉(zhuǎn)入棉花細胞前，可以通過PCR擴增獲得大量抗蟲基因，PCR擴增抗蟲基因的前提是要測定該基因兩端部分核苷酸序列，目的是

便于合成引物

便于合成引物

。PCR每次循環(huán)都包括變性、

復性

復性

和延伸三步。
（2）由圖1和圖2分析可知，研究人員應選擇

HindIII和Sau3AI

HindIII和Sau3AI

限制酶處理含抗蟲基因的DNA片段，在處理質(zhì)粒的時候應選擇

HindIII和BamHI

HindIII和BamHI

限制酶。質(zhì)粒DNA中含有的啟動子是

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識別并結(jié)合的位點。
（3）蛋白酶抑制劑基因也是一種抗蟲基因，某研究團隊將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨或共同轉(zhuǎn)化，獲得轉(zhuǎn)基因植株。
①將抗蟲基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)時，除了采用我國科學家獨創(chuàng)的花粉管通道法，還可以采用

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

法，使用該方法時，應將抗蟲基因插入到質(zhì)粒的

T-DNA

T-DNA

區(qū)域。
②標記基因可用于檢測目的基因是否導入，由圖2可知，應選含有

X抗生素

X抗生素

的培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的細胞。
③圖3為將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨或共同轉(zhuǎn)化的實驗結(jié)果，據(jù)結(jié)果分析，

NaPI

NaPI

（選填“NaPI”或“Stpin1A”或“NaPI+Stpin1A”）轉(zhuǎn)基因棉花的抗蟲效果最佳，得出該結(jié)論的原因是

飼喂NaPI轉(zhuǎn)基因植物的蟲體質(zhì)量較差，且每株棉鈴蟲數(shù)較最少

飼喂NaPI轉(zhuǎn)基因植物的蟲體質(zhì)量較差，且每株棉鈴蟲數(shù)較最少

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