氮是植物生長發(fā)育不可缺少的元素之一,提高植物對氮元素的利用效率有利于農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和環(huán)境保護。
(1)植物從土壤中吸收硝酸鹽,可用于在細胞中生成
蛋白質(zhì)、核酸(DNA、RNA)
蛋白質(zhì)、核酸(DNA、RNA)
等含氮的生物大分子。不同濃度的硝酸鹽能夠誘導相關基因表達,從而調(diào)控自身代謝和生長,可知硝酸鹽也是調(diào)節(jié)植物生命活動的 信息分子
信息分子
。
(2)CHL1是植物細胞膜上的硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白,NLP是硝酸鹽受體,NLP發(fā)生磷酸化后會與硝酸鹽響應基因的啟動子結(jié)合激活轉(zhuǎn)錄。研究人員將上述兩種蛋白功能缺失突變體chl1和nlp與野生型(WT)擬南芥種子分別栽種在含硝酸鹽的培養(yǎng)基中,檢測幼苗生長情況,結(jié)果如圖1。實驗結(jié)果顯示 chl1和WT幼苗鮮重無顯著差異,而nlp幼苗鮮重明顯低于chl1和WT
chl1和WT幼苗鮮重無顯著差異,而nlp幼苗鮮重明顯低于chl1和WT
,推測NLP發(fā)揮更主要的作用。
(3)為檢驗NLP的N端與C端區(qū)域的功能,進行了蛋白質(zhì)截斷實驗。實驗方案及結(jié)果如圖2所示,利用報告基因分別與6組不同類型的目的基因制備轉(zhuǎn)基因擬南芥,分別置于含KCl或KNO3的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
根據(jù)實驗結(jié)果可以得出的結(jié)論是 NLP的C端具有激活硝酸鹽響應基因啟動子的作用,N端會抑制此作用,硝酸鹽能夠解除抑制作用
NLP的C端具有激活硝酸鹽響應基因啟動子的作用,N端會抑制此作用,硝酸鹽能夠解除抑制作用
。
(4)研究者推測硝酸鹽結(jié)合NLP后會引起空間結(jié)構(gòu)改變,使N端與C端相互結(jié)合后發(fā)揮功能。為直觀了解硝酸鹽對NLP的作用,將黃色熒光蛋白基因m分為兩部分,分別連接到 NLP基因的兩端
NLP基因的兩端
,利用改造的基因制備轉(zhuǎn)基因擬南芥,分別置于含KCl或KNO3的培養(yǎng)基中培養(yǎng),實驗在5分鐘即可觀察到 含KNO3的培養(yǎng)基中可觀察到黃色熒光,而含KCl的培養(yǎng)基中沒有
含KNO3的培養(yǎng)基中可觀察到黃色熒光,而含KCl的培養(yǎng)基中沒有
,證實推測成立。
(5)已有研究顯示,當環(huán)境中存在硝酸鹽時野生型擬南芥細胞內(nèi)Ca2+濃度會迅速提高,而突變體chl1無此現(xiàn)象,當用鈣離子通道阻滯劑處理細胞后,響應硝酸鹽的基因表達被顯著抑制,去除細胞中的Ca2+,磷酸化的NLP含量下降。綜合上述實驗結(jié)果,在圖3中用箭頭表示出植物感受硝酸鹽后的信號作用途徑。