動(dòng)物血液常常被選作提取血紅蛋白的實(shí)驗(yàn)材料,請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題:
(1)實(shí)驗(yàn)前取新鮮的血液,要在采血容器中預(yù)先加入
檸檬酸鈉
檸檬酸鈉
,其作用是 防止血液凝固
防止血液凝固
。樣品處理及粗分離應(yīng)包括 紅細(xì)胞的洗滌
紅細(xì)胞的洗滌
、血紅蛋白釋放、分離血紅蛋白溶液和透析。
(2)下列試劑或儀器可用于血紅蛋白釋放的是 BDF
BDF
。
A.0.9%的生理鹽水
B.甲苯
C.磷酸緩沖液
D.蒸餾水
E.離心機(jī)
F.磁力攪拌器
(3)凝膠色譜法分離血紅蛋白質(zhì)中使用的凝膠是交聯(lián)葡聚糖凝膠(SephadexG-75),其中G表示凝膠的交聯(lián)程度、膨脹程度及 分離范圍
分離范圍
,75的含義是 每克凝膠膨脹時(shí)吸水7.5克
每克凝膠膨脹時(shí)吸水7.5克
。為加快凝膠膨脹,可以將濕凝膠用沸水浴加熱,這樣不僅節(jié)約時(shí)間,還能 去除凝膠中帶有的微生物,排除凝膠內(nèi)的空氣
去除凝膠中帶有的微生物,排除凝膠內(nèi)的空氣
。填裝凝膠柱時(shí)不得有氣泡,原因是 氣泡會(huì)擾亂洗脫液中蛋白質(zhì)洗脫次序,降低分離效果
氣泡會(huì)擾亂洗脫液中蛋白質(zhì)洗脫次序,降低分離效果
。
(4)電泳是分離鑒定蛋白質(zhì)的常用方法。一個(gè)蛋白質(zhì)分子在某pH溶液時(shí),蛋白質(zhì)解離成正負(fù)離子,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)凈電荷為0時(shí)對(duì)應(yīng)的溶液pH稱(chēng)為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)(pI)。蛋白質(zhì)所處溶液pH>pI時(shí),蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷,反之帶正電荷。下表為幾種血清蛋白的等電點(diǎn),將血清蛋白在pH=8.6的緩沖液中進(jìn)行電泳,結(jié)果如圖所示。
蛋白質(zhì)種類(lèi) |
清蛋白 |
α1球蛋白 |
α2球蛋白 |
β球蛋白 |
γ球蛋白 |
等電點(diǎn)(pI) |
4.84 |
5.06 |
5.06 |
5.12 |
6.8~7.3 |
據(jù)圖分析,帶負(fù)電荷最多的球蛋白是
清蛋白
清蛋白
,α1和α2球蛋白分子量較小的是
α1球蛋白
α1球蛋白
。