異源器官移植是替代受損或衰竭器官的有效方法。中國(guó)科學(xué)院研究員通過將紅色熒光標(biāo)記的人多功能干細(xì)胞(iPSCs)注射到豬胚胎中,成功借助豬胚胎培育出人源性腎臟,如圖1所示。該研究首先通過敲除豬胚胎細(xì)胞中與腎臟發(fā)育密切相關(guān)的基因P和基因M,獲得腎臟缺陷型豬胚胎,為后續(xù)iPSCs的生長(zhǎng)和分化提供了必要的胚胎互補(bǔ)環(huán)境;其次,向iPSCs轉(zhuǎn)入促增殖基因和抗凋亡基因,并誘導(dǎo)兩者高水平表達(dá),如圖2所示,大大增強(qiáng)iPSCs在豬胚胎中的存活率。?
回答下列問題:
(1)改造人類多功能干細(xì)胞:
①圖2中質(zhì)粒上有促增殖基因、紅色熒光蛋白基因和
逆轉(zhuǎn)錄酶基因、抗凋亡基因、轉(zhuǎn)錄激活蛋白A的基因、與目的基因整合至人類基因組有關(guān)的酶的基因、介導(dǎo)病毒侵染人體細(xì)胞相關(guān)的蛋白的基因等
逆轉(zhuǎn)錄酶基因、抗凋亡基因、轉(zhuǎn)錄激活蛋白A的基因、與目的基因整合至人類基因組有關(guān)的酶的基因、介導(dǎo)病毒侵染人體細(xì)胞相關(guān)的蛋白的基因等
基因(答出兩種即可)等。
②獲得轉(zhuǎn)基因iPSCs細(xì)胞后,需將其培養(yǎng)在含 四環(huán)素
四環(huán)素
的培養(yǎng)液中,從而實(shí)現(xiàn)抗凋亡蛋白與促增殖蛋白的過量表達(dá)。為檢驗(yàn)誘導(dǎo)表達(dá)效果,提取培養(yǎng)后細(xì)胞的蛋白質(zhì),利用蛋白質(zhì)的帶電特性,通過 電泳
電泳
將不同大小的蛋白質(zhì)分開,再用帶標(biāo)記的 針對(duì)目標(biāo)蛋白(或抗凋亡蛋白與促增殖蛋白)的抗體分子
針對(duì)目標(biāo)蛋白(或抗凋亡蛋白與促增殖蛋白)的抗體分子
進(jìn)行檢測(cè)。
(2)構(gòu)建雙基因敲除的豬胚胎:
①設(shè)法獲得敲除基因P的豬胚胎成纖維細(xì)胞后,將細(xì)胞與去核卵母細(xì)胞通過 電刺激
電刺激
進(jìn)行誘導(dǎo)融合和激活,獲得重組細(xì)胞。
②向重組細(xì)胞注射堿基編輯器CBE,CBE可將基因M特定序列中的堿基C脫去氨基轉(zhuǎn)變?yōu)閁,在DNA復(fù)制后,使堿基對(duì)C-G被A-T替換,編碼谷氨酰胺的密碼子(CAA)轉(zhuǎn)變?yōu)榻K止密碼子(UAA),這將導(dǎo)致 翻譯時(shí)序列合成提前終止,表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能異常
翻譯時(shí)序列合成提前終止,表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能異常
,從而達(dá)到敲除基因D的目的。
③雙基因敲除后的重組細(xì)胞通過胚胎體外培養(yǎng)至 囊胚期或桑葚胚
囊胚期或桑葚胚
后轉(zhuǎn)移至代孕母體內(nèi)繼續(xù)發(fā)育,最終獲得缺失腎臟的豬胚胎。
(3)嵌合體胚胎的培養(yǎng)與檢測(cè):
將轉(zhuǎn)基因iPSCs注入雙基因敲除的豬早期胚胎中獲得嵌合體胚胎,將嵌合胚胎移植至代孕豬體內(nèi),在胚胎發(fā)育的第28天終止妊娠而不是待其發(fā)育為成體豬時(shí)再終止生命的原因是 避免倫理問題
避免倫理問題
。對(duì)胚胎進(jìn)行解剖觀察,觀察胚胎中 紅色熒光
紅色熒光
的分布可知人iPSCs參與形成嵌合體胚胎的哪些組織器官。
結(jié)果發(fā)現(xiàn),人細(xì)胞絕大部分位于腎臟,而胚胎的其余部分則基本由豬細(xì)胞組成,形成該結(jié)果的機(jī)理是 人細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)能力弱于豬細(xì)胞,因此其它部位人類細(xì)胞無(wú)法大量介入;豬胚胎缺乏形成腎臟所需的關(guān)鍵基因,無(wú)法形成腎臟,形成空缺,此時(shí)人細(xì)胞進(jìn)入,發(fā)育形成腎臟
人細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)能力弱于豬細(xì)胞,因此其它部位人類細(xì)胞無(wú)法大量介入;豬胚胎缺乏形成腎臟所需的關(guān)鍵基因,無(wú)法形成腎臟,形成空缺,此時(shí)人細(xì)胞進(jìn)入,發(fā)育形成腎臟
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