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切割DNA分子的工具是限制性內切核酸酶（簡稱限制酶），它們能夠識別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖中標注了相關限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復標注，請回答下列問題：
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限制酶 BamHⅠ BclⅠ Sau3AⅠ HindⅢ
識別序列及切割位點 G↓GATCC
CCTAG↑G		 T↓GATCA
ACTAG↑T		 ↓GATC
CTAG↑		 A↓AGCTT
TTCGA↑A
（1）在基因工程的基本操作程序中，核心步驟是
基因表達載體的構建
基因表達載體的構建
，其作用是
讓目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用
讓目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用
。
（2）用圖中質粒和目的基因構建重組質粒，應選用表中
BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ
兩種限制酶切割，不選用另外兩種酶的理由是
若選用BamHⅠ或Sau3AⅠ酶會使質粒中的兩個標記基因損壞，不利于后續(xù)重組質粒的篩選
若選用BamHⅠ或Sau3AⅠ酶會使質粒中的兩個標記基因損壞，不利于后續(xù)重組質粒的篩選
。
（3）不同的限制酶切割可能產生相同的黏性末端，從而可以使不同的限制酶切割的末端能夠配對連接，這在基因工程操作中有什么積極意義？
使切割位點的選擇范圍擴大
使切割位點的選擇范圍擴大
。若BamHⅠ酶切的DNA黏性末端與BclⅠ酶切的DNA黏性末端通過DNA連接酶相連接，連接后的DNA序列，這兩種酶
都不能
都不能
（填“都能”“都不能”或“只有一種能”）切開。

【答案】基因表達載體的構建；讓目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用；BclⅠ和HindⅢ；若選用BamHⅠ或Sau3AⅠ酶會使質粒中的兩個標記基因損壞，不利于后續(xù)重組質粒的篩選；使切割位點的選擇范圍擴大；都不能
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網所有，未經書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：8引用：1難度：0.6
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  • 1．科研小組利用基因工程技術將“抗蟲基因”轉入棉花細胞成功培育出抗蟲棉，該技術所用的含“抗蟲基因”的DNA與質粒上相關限制酶的酶切位點分別如圖1、圖2所示（不同限制酶的識別序列和酶切位點：BamHⅠ5′-G↓GATCC-3′，BclⅠ5′-T↓GATCA-3′，Sau3AⅠ5′-↓GATC-3′，HindⅢ5′-A↓AGCTT-3′）。請分析并回答以下問題：
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    （1）將抗蟲基因轉入棉花細胞前，可以通過PCR擴增獲得大量抗蟲基因，PCR擴增前應根據
     
    設計引物。培育轉基因棉花的核心工作是
     
    。由圖1和圖2分析可知，研究人員應選擇
     
    限制酶處理含抗蟲基因的DNA片段，在處理質粒的時候應選擇
     
    限制酶。
    （2）蛋白酶抑制劑基因也是一種抗蟲基因，某研究團隊將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨或共同轉化，獲得轉基因植株。
    ①將抗蟲基因轉入植物體內時，除了采用我國科學家獨創(chuàng)的花粉管通道法，還可以采用
     
    法，使用該方法時，應將抗蟲基因插入到質粒的
     
    區(qū)域。
    ②標記基因可用于檢測目的基因是否導入，由圖2可知，應選含有
     
    的培養(yǎng)基篩選含有重組質粒的細胞。為了檢測目的基因在受體細胞中是否穩(wěn)定表達，在分子水平上的檢測方法為
     
    。
    ③圖3為將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨或共同轉化的實驗結果，據結果分析，
     
    （選填“NaPI”或“StpinlA”或“NaPI+StpinlA”）轉基因棉花的抗蟲效果最佳，得出該結論的原因是
     
    。

    發(fā)布：2024/11/19 5:30:2組卷：38引用：2難度：0.5

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    注：①交錯延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動子Pr1a可在煙草葉肉細胞中特異性啟動基因的轉錄。③圖中生長素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉錄獲得的DNA片段，可使植物細胞合成生長素。

    發(fā)布：2024/11/16 21:0:1組卷：36引用：2難度：0.5

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    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7
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