土壤中富含有機(jī)營(yíng)養(yǎng)和無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，可為多種微生物提供生活所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，土壤中微生物種類豐富。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中施用的尿素必須由土壤中分解尿素的細(xì)菌將其分解后才能被農(nóng)作物吸收利用，所以，在施用尿素的農(nóng)田土壤中含有大量分解尿素的細(xì)菌。某生物興趣小組開(kāi)展了“分離土壤中分解尿素的細(xì)菌并進(jìn)行計(jì)數(shù)”的實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題。
（1）培養(yǎng)基配方：KH₂PO₄1.4g,Na₂HPO₄2.1g,MgSO₄?7H₂O0.2g,葡萄糖10.0g,尿素1.0g,蒸餾水1000mL，瓊脂，無(wú)菌水及調(diào)節(jié)pH的試劑等。
①該培養(yǎng)基中葡萄糖的作用是

為微生物提供碳源、能源

為微生物提供碳源、能源

，培養(yǎng)基中作為唯一氮源的物質(zhì)是

尿素

尿素

；從功能上看，該培養(yǎng)基屬于

選擇

選擇

培養(yǎng)基。
②培養(yǎng)基中添加一定量KH₂PO₄和Na₂HPO₄，請(qǐng)分析所起的作用（至少說(shuō)出兩點(diǎn)）

為微生物提供無(wú)機(jī)鹽，維持培養(yǎng)基的pH穩(wěn)定

為微生物提供無(wú)機(jī)鹽，維持培養(yǎng)基的pH穩(wěn)定

。
③分析培養(yǎng)基成分和實(shí)驗(yàn)?zāi)康模门囵B(yǎng)基的物理狀態(tài)為

固態(tài)

固態(tài)

。
（2）土壤取樣：用鐵鏟取表層以下3～8cm的土壤10g,并裝在信封中備用。所用鐵鏟和信封在使用前都需要

滅菌

滅菌

。
（3）制備土壤懸液：在酒精燈火焰旁，稱取1g土壤樣品，倒入盛有99mL

無(wú)菌水

無(wú)菌水

的錐形瓶中，按要求制成10^-2g/mL的土壤懸液。并進(jìn)行一系列的梯度稀釋，獲得一系列濃度不同的土壤懸液。培養(yǎng)基配制及平板制作。
（4）接種：從濃度最低的土壤懸液開(kāi)始，分別吸取0.1mL懸液，采用

稀釋涂布平板

稀釋涂布平板

法將其接種到平板表面。在這一步驟中，下列選項(xiàng)不需要的是

③④

③④

。（填序號(hào)）
①酒精燈
②培養(yǎng)皿
③顯微鏡
④接種環(huán)
⑤涂布器
（5）培養(yǎng)與觀察，計(jì)數(shù)菌落：按要求進(jìn)行培養(yǎng)，并每24h觀察一次每個(gè)培養(yǎng)皿中的細(xì)菌菌落。計(jì)數(shù)時(shí)，選取菌落數(shù)為

30～300

30～300

的一組為樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。