由指狀青霉引起的綠霉病是柑橘采摘后最具破壞性的病害，使用拮抗微生物是防治柑橘綠霉病的有效手段?？蒲腥藛T期望從海洋中篩選到產(chǎn)特殊抑菌活性物質(zhì)的拮抗菌株。請回答下列問題：
（1）在實驗室培養(yǎng)微生物時，通常需要對所需的玻璃器皿進行滅菌，滅菌的方法有

高壓蒸汽滅菌法、干熱滅菌法

高壓蒸汽滅菌法、干熱滅菌法

（答出兩種）。
（2）科研人員利用稀釋涂布平板法初步從海泥中分離海洋微生物，該方法大致分為三個步驟：①取10g海泥，加入裝有90mL

無菌水

無菌水

的三角瓶中混合均勻，梯度稀釋到10⁴倍；②吸取10³倍、10⁴倍稀釋液涂布在

固體培養(yǎng)基

固體培養(yǎng)基

（填“固體培養(yǎng)基”或“液體培養(yǎng)基”）的表面；③28℃培養(yǎng)至菌落出現(xiàn)。培養(yǎng)過程中可對微生物進行計數(shù)，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣做的目的是

防止因培養(yǎng)時間不足而遺漏菌落的數(shù)目

防止因培養(yǎng)時間不足而遺漏菌落的數(shù)目

。
（3）挑取單菌落進行劃線純化3次。挑取菌落前，接種環(huán)灼燒后需冷卻，冷卻的目的是

防止溫度過高殺死菌種

防止溫度過高殺死菌種

。將純化的單菌落接種到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，若要對菌種進行長期保存，可以采用甘油管藏的方法，具體的操作是

在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌，將1mL菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱中保存

在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌，將1mL菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱中保存

。
（4）將初篩獲得的對指狀青霉具有拮抗效果的海洋細(xì)菌接種于液體培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，設(shè)計實驗驗證其產(chǎn)生的抑菌活性物質(zhì)的抑菌效果。實驗組中加入適量的發(fā)酵上清液，對照組應(yīng)加入

等量未接種海洋細(xì)菌的液體培養(yǎng)基

等量未接種海洋細(xì)菌的液體培養(yǎng)基

，然后兩組分別接種等量的指狀青霉，一段時間后，觀察其生長狀況。