研究人員利用基因敲除技術(shù)將豬的肌生成抑制蛋白基因敲除，從而得到了高骨骼肌含量的克隆豬?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）常用基因敲除技術(shù)是通過(guò)同源重組將外源基因定點(diǎn)整合人靶細(xì)胞基因組上某一確定的位點(diǎn)，以定點(diǎn)修飾改造染色體上某一基因。相對(duì)傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，該基因敲除技術(shù)的最大優(yōu)點(diǎn)是

克服了傳統(tǒng)轉(zhuǎn)基因技術(shù)中目的基因整合的盲目性和隨機(jī)性（能夠定點(diǎn)整合）

克服了傳統(tǒng)轉(zhuǎn)基因技術(shù)中目的基因整合的盲目性和隨機(jī)性（能夠定點(diǎn)整合）

。要實(shí)現(xiàn)敲除肌生成抑制蛋白基因的目的，首先要構(gòu)建替換型打靶載體，該過(guò)程中需要的工具酶有

限制酶和DNA連接酶

限制酶和DNA連接酶

。
（2）將替換型打靶載體通過(guò)顯微注射法導(dǎo)入豬胚胎干細(xì)胞，胚胎干細(xì)胞是從著床前胚胎分離出的

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

細(xì)胞。培養(yǎng)豬胚胎干細(xì)胞時(shí)，首先要在培養(yǎng)皿底部制備一層細(xì)胞，這層細(xì)胞一般是

胚胎成纖維細(xì)胞

胚胎成纖維細(xì)胞

。
（3）篩選出靶細(xì)胞，導(dǎo)入豬的

囊胚

囊胚

中，再將其植入代孕豬體內(nèi)，使其發(fā)育成嵌合體豬，再經(jīng)過(guò)回交、篩選就可以得到肌生成抑制蛋白基因敲除純合體。為了快速擴(kuò)大基因敲除豬的種群，除進(jìn)行有性生殖外，還可以采取

細(xì)胞核移植

細(xì)胞核移植

技術(shù)。為證明肌生成抑制蛋白基因敲除豬的表現(xiàn)型改變確實(shí)是由于敲除了該基因的緣故，可以采用的實(shí)驗(yàn)思路是

給基因敲除豬導(dǎo)入肌生成抑制蛋白基因（或者直接注射肌生成抑制蛋白），養(yǎng)殖一段時(shí)間后觀察豬骨骼肌的生長(zhǎng)情況

給基因敲除豬導(dǎo)入肌生成抑制蛋白基因（或者直接注射肌生成抑制蛋白），養(yǎng)殖一段時(shí)間后觀察豬骨骼肌的生長(zhǎng)情況

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