某生物興趣小組開展DNA粗提取的相關(guān)探究活動,具體步驟如下:
材料處理:稱取新鮮的花菜、辣椒和蒜黃各2份,每份10g,剪碎后分成兩組,一組置于20℃、另一組置于-20℃條件下保存24h。
DNA粗提?。?br />第一步:將上述材料分別放入研缽中,各加入15mL研磨液,充分研磨,用兩層紗布過濾,取濾液備用;
第二步:先向6只小燒杯中分別注入10C濾液,再加入20mL體積分數(shù)為95%的酒精溶液,然后用玻璃棒緩緩地向一個方向攪拌,使絮狀物纏繞在玻璃棒上;
第三步:取6支試管,分別加入等量的質(zhì)量濃度為2mol/LNaCl溶液溶解上述絮狀物。
DNA檢測:在上述試管中各加入4mL二苯胺試劑,混合均勻后,置于沸水中加熱5min,待試管冷卻后比較溶液的顏色深淺,結(jié)果如下表。
材料保存溫度 |
花菜 |
辣椒 |
蒜黃 |
20℃ |
++ |
+ |
+++ |
-20℃ |
+++ |
++ |
++++ |
(“+”越多表示顏色越深)
分析上述實驗過程,回答下列問題:
(1)該探究性實驗的課題名稱是:
探究不同材料和不同保存溫度對DNA提取量的影響
探究不同材料和不同保存溫度對DNA提取量的影響
。
(2)DNA粗提取第二步中所用的酒精必須經(jīng)過
(充分)預(yù)冷
(充分)預(yù)冷
才能使用。
(3)表中的顏色為
藍色
藍色
,顏色的深淺代表了
DNA含量的多少
DNA含量的多少
。
(4)DNA檢測時沸水浴加熱的目的是
加速顏色反應(yīng)
加速顏色反應(yīng)
,同時說明DNA對高溫有較強的
耐受性
耐受性
。
(5)根據(jù)實驗結(jié)果,得出結(jié)論并分析。
①結(jié)論1:與20℃相比,相同實驗材料在-20℃條件下保存時,DNA的提取量較多。
②結(jié)論2:等質(zhì)量的不同實驗材料,在相同的保存溫度下,
DNA的提取量不同(或從蒜黃提取的DNA量最多、從辣椒提取的DNA量最少等)
DNA的提取量不同(或從蒜黃提取的DNA量最多、從辣椒提取的DNA量最少等)
。
(6)氯仿密度大于水,能使蛋白質(zhì)變性沉淀,與水和DNA均不相溶,且對DNA影響極小。為了進一步提高DNA純度,依據(jù)氯仿的特性,在DNA粗提取第三步的基礎(chǔ)上繼續(xù)操作的步驟是:
將第三步獲得的溶液與等量的氯仿充分混合,靜置一段時間后,吸取上清液
將第三步獲得的溶液與等量的氯仿充分混合,靜置一段時間后,吸取上清液
,然后用體積分數(shù)為95%的冷酒精溶液使DNA析出。