癌癥患者進(jìn)行化療或放療之后,體內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量大幅度降低,可以注射粒細(xì)胞——巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)增加白細(xì)胞的數(shù)量。在自然條件下,此細(xì)胞因子的含量很低,很難獲得。某科研團(tuán)隊(duì)將人的GMCSF基因?qū)氪竽c桿菌,大量生產(chǎn)重組GM-CSF,滿足了臨床需求?;卮鹣铝袉?wèn)題:
(1)從人血液中提取mRNA通過(guò)
反轉(zhuǎn)錄
反轉(zhuǎn)錄
過(guò)程獲得DNA,再以DNA為模板,利用 PCR
PCR
技術(shù)擴(kuò)增GMCSF基因。使用該技術(shù)時(shí),需加入耐高溫的DNA聚合酶,其作用是 催化合成DNA子鏈
催化合成DNA子鏈
。
(2)質(zhì)粒通常含有抗生素抗性基因,該基因的作用是 便于將含入的GMCSF基因的受體細(xì)胞篩選出來(lái)
便于將含入的GMCSF基因的受體細(xì)胞篩選出來(lái)
。構(gòu)建重組質(zhì)粒過(guò)程中,人的GMCSF基因與質(zhì)粒通常使用相同的限制酶進(jìn)行切割,原因是 用相同的限制酶切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒能產(chǎn)生相同的末端,以便連接
用相同的限制酶切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒能產(chǎn)生相同的末端,以便連接
。
(3)大腸桿菌作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是 繁殖快、為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少
繁殖快、為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少
(答出2點(diǎn))。在添加了該抗生素的培養(yǎng)基中得到了4個(gè)大腸桿菌菌落,從菌落中提取相關(guān)物質(zhì),進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果如圖所示。根據(jù)結(jié)果顯示,應(yīng)選擇 4
4
號(hào)菌落進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。