微生物的生長繁殖需要不同種類的碳源、氮源、無機鹽、生長因子等營養(yǎng)物質，若培養(yǎng)基中的某種營養(yǎng)物質不能被微生物利用，微生物便不能生長。根據(jù)這一特性，可將微生物接種在只缺少某種營養(yǎng)物質的基礎培養(yǎng)基中，再將所缺的營養(yǎng)物質點植于平板上，該營養(yǎng)物質便逐漸擴散于植點周圍。該微生物若需要此種營養(yǎng)物質，便在這種營養(yǎng)物質擴散處生長繁殖，形成肉眼可見的菌落圈，這種測定微生物營養(yǎng)需求的方法稱為生長譜法。某興趣小組嘗試用生長譜法測定某種大腸桿菌對糖類（碳源）的需求情況，操作流程如下：
Ⅰ．培養(yǎng)基的制備。該小組所用無碳培養(yǎng)基配方如下（加水定容至1L）：
| 成分 |
NaCl |
KH2PO4 |
K2HPO4 |
（NH4）2SO4 |
MgSO4?7H2O |
瓊脂 |
| 質量（g） |
1 |
0.5 |
0.5 |
2 |
0.2 |
20 |
同時配制質量分數(shù)為10%的葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖溶液各50mL。
Ⅱ．將大腸桿菌懸液與溶化并冷卻至50℃的固體培養(yǎng)基混勻，倒平板。
Ⅲ．將已凝固的平板背面用記號筆劃分為四個區(qū)，并注明要點植的糖類名稱。
Ⅳ．通過無菌操作分別加入蘸有不同糖類的無菌濾紙片，待平板吸收干燥后倒置培養(yǎng)24小時。
結合所學知識回答相關的問題：
（1）無碳培養(yǎng)基配方中加入（NH
4）
2SO
4的目的是
提供氮源
提供氮源
。對培養(yǎng)基及糖溶液通常采用的滅菌方法是
高壓蒸汽滅菌
高壓蒸汽滅菌
。倒平板后用
稀釋涂布平板
稀釋涂布平板
法進行接種。
（2）該小組發(fā)現(xiàn)最終在培養(yǎng)基的四個區(qū)內均有菌落圈產(chǎn)生，但大小不同，據(jù)此得到的初步結論是
大腸杄菌可以利用四種糖類（葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖）作為碳源，但利用的程度不同
大腸杄菌可以利用四種糖類（葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖）作為碳源，但利用的程度不同
。
（3）如果在此實驗中發(fā)現(xiàn)某一不被該大腸桿菌利用的碳源的點植區(qū)域也長出菌落圈，試分析可能的原因（寫出2條即可）
有雜菌混入；該大腸桿菌發(fā)生了突變；該大腸桿菌可能會利用瓊脂多糖
有雜菌混入；該大腸桿菌發(fā)生了突變；該大腸桿菌可能會利用瓊脂多糖
。
（4）生長譜法還可用于某些營養(yǎng)缺陷型菌株（失去合成某種生長因子能力的菌株）的篩選和鑒定，例如大腸桿菌經(jīng)紫外線誘變處理后會產(chǎn)生一些營養(yǎng)缺陷型突變個體，現(xiàn)已純化并制備出某營養(yǎng)缺陷型的菌懸液，但不清楚是氨基酸缺陷型、維生素缺陷型還是氨基酸-維生素缺陷型，請簡要寫出用生長譜法進行鑒定的思路，并預期可能的結果及結論。
將菌懸液與溶化并冷卻至50℃的不含氨基酸和維生素的基礎培養(yǎng)基混勻，倒平板；將培養(yǎng)基劃分成兩個相等的區(qū)域A、B；A區(qū)點植氨基酸、B區(qū)點植維生素；在適宜溫度下培養(yǎng)，觀察菌落產(chǎn)生的區(qū)域。若菌落只在A區(qū)產(chǎn)生，則為氨基酸缺陷型；若菌落只在B區(qū)產(chǎn)生，則為維生素缺陷型；若菌落產(chǎn)生在AB交界處，則為氨基酸-維生素缺陷型
將菌懸液與溶化并冷卻至50℃的不含氨基酸和維生素的基礎培養(yǎng)基混勻，倒平板；將培養(yǎng)基劃分成兩個相等的區(qū)域A、B；A區(qū)點植氨基酸、B區(qū)點植維生素；在適宜溫度下培養(yǎng)，觀察菌落產(chǎn)生的區(qū)域。若菌落只在A區(qū)產(chǎn)生，則為氨基酸缺陷型；若菌落只在B區(qū)產(chǎn)生，則為維生素缺陷型；若菌落產(chǎn)生在AB交界處，則為氨基酸-維生素缺陷型
。
