某動(dòng)物體內(nèi)含有某目的基因,研究者欲將該基因?qū)氪竽c桿菌的質(zhì)粒中保存,該質(zhì)粒含有氨芐青霉素抗性基因(AmpR)、LacZ基因及一些酶切位點(diǎn),其結(jié)構(gòu)和簡單的操作步驟如圖所示?;卮鹣铝袉栴}:
(1)保存基因技術(shù)的成熟使構(gòu)建某種生物的基因文庫成為可能,重組DNA技術(shù)是保存生物基因的關(guān)鍵技術(shù)。據(jù)圖總結(jié)在受體菌中保存基因的基本步驟:
目的基因的篩選與獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定→保存含目的基因的細(xì)胞(或細(xì)菌)
目的基因的篩選與獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定→保存含目的基因的細(xì)胞(或細(xì)菌)
(用→將各步驟連接)。
(2)在第③步中,為了使質(zhì)粒DNA能與目的基因連接,需要在混合物中加入 DNA連接
DNA連接
酶。若第②步用同一種限制酶處理質(zhì)粒和目的基因,僅考慮1個(gè)目的基因和1個(gè)質(zhì)粒,則在第③步的混合物中,會(huì)形成 2
2
種含目的基因的重組產(chǎn)物。進(jìn)行第④步之前一般用Ca2+對(duì)大腸桿菌進(jìn)行處理,目的是 使大腸桿菌處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)
使大腸桿菌處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)
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(3)在僅添加了氨芐青霉素的培養(yǎng)基上篩選出的細(xì)胞不一定是目的細(xì)胞,請(qǐng)說明理由:導(dǎo)入不含目的基因的質(zhì)粒的細(xì)胞也能在含有氨芐青霉素成分的培養(yǎng)基上存活
導(dǎo)入不含目的基因的質(zhì)粒的細(xì)胞也能在含有氨芐青霉素成分的培養(yǎng)基上存活
。請(qǐng)對(duì)篩選目的細(xì)胞的操作提出完善意見:在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素成分的同時(shí)加入X-gal物質(zhì),培養(yǎng)一段時(shí)間后,菌落顏色為白色的即為目的菌落
在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素成分的同時(shí)加入X-gal物質(zhì),培養(yǎng)一段時(shí)間后,菌落顏色為白色的即為目的菌落
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