當(dāng)前位置： 2020年山東省德州市高考生物一模試卷> 試題詳情

熒光蛋白（GFP）在紫外光下會(huì)發(fā)出綠色熒光，某科研團(tuán)隊(duì)將GFP基因插入質(zhì)粒P中構(gòu)建了重組質(zhì)粒載體P₀，用于基因工程中基因表達(dá)載體（P₁）的篩選和鑒定。部分過程如圖所示，如表為部分限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)。回答問題：

限制酶 EcoRⅤ Sau3AⅠ BamHⅠ

識(shí)別序列及切割位點(diǎn) CTA^↓TAG
GTA_↑TAG ^↓GATC
CATG_↑ G^↓GATCC
CCTAG_↑G

（1）過程①中用EcoRV酶切獲得的目的基因具有
平
平
末端，過程②表示利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，前提是要根據(jù)
一段已知目的基因的核苷酸序列
一段已知目的基因的核苷酸序列
設(shè)計(jì)出引物，此外還需在引物的一端加上
GATC
GATC
序列，以便于P₁的構(gòu)建和篩選。
（2）過程③中，質(zhì)粒P₀需用限制酶
BamHⅠ
BamHⅠ
切割，才能與擴(kuò)增出的目的基因在
DNA連接
DNA連接
酶作用下形成P₁。
（3）為了篩選出含有質(zhì)粒P₁的菌落，需采用添加
四環(huán)素
四環(huán)素
的培養(yǎng)基平板進(jìn)行培養(yǎng)，在紫外光激發(fā)下
不發(fā)出綠色熒光
不發(fā)出綠色熒光
的菌落，即為含有P₁的菌落。
（4）提取經(jīng)上述篩選所得菌落的RNA，通過
逆轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄）
逆轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄）
獲得DNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若最終未能檢測(cè)出目的基因，可能的原因是
目的基因未能在受體菌中轉(zhuǎn)錄
目的基因未能在受體菌中轉(zhuǎn)錄
。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．

【答案】平；一段已知目的基因的核苷酸序列；GATC；BamHⅠ；DNA連接；四環(huán)素；不發(fā)出綠色熒光；逆轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄）；目的基因未能在受體菌中轉(zhuǎn)錄

【解答】

【點(diǎn)評(píng)】

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：18引用：2難度：0.7

相似題

1．科研小組利用基因工程技術(shù)將“抗蟲基因”轉(zhuǎn)入棉花細(xì)胞成功培育出抗蟲棉，該技術(shù)所用的含“抗蟲基因”的DNA與質(zhì)粒上相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)分別如圖1、圖2所示（不同限制酶的識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)：BamHⅠ5′-G^↓GATCC-3′，BclⅠ5′-T^↓GATCA-3′，Sau3AⅠ5′-^↓GATC-3′，HindⅢ5′-A^↓AGCTT-3′）。請(qǐng)分析并回答以下問題：

（1）將抗蟲基因轉(zhuǎn)入棉花細(xì)胞前，可以通過PCR擴(kuò)增獲得大量抗蟲基因，PCR擴(kuò)增前應(yīng)根據(jù)

設(shè)計(jì)引物。培育轉(zhuǎn)基因棉花的核心工作是

。由圖1和圖2分析可知，研究人員應(yīng)選擇

限制酶處理含抗蟲基因的DNA片段，在處理質(zhì)粒的時(shí)候應(yīng)選擇

限制酶。
（2）蛋白酶抑制劑基因也是一種抗蟲基因，某研究團(tuán)隊(duì)將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨(dú)或共同轉(zhuǎn)化，獲得轉(zhuǎn)基因植株。
①將抗蟲基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)時(shí)，除了采用我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的花粉管通道法，還可以采用

法，使用該方法時(shí)，應(yīng)將抗蟲基因插入到質(zhì)粒的

區(qū)域。
②標(biāo)記基因可用于檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入，由圖2可知，應(yīng)選含有

的培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的細(xì)胞。為了檢測(cè)目的基因在受體細(xì)胞中是否穩(wěn)定表達(dá)，在分子水平上的檢測(cè)方法為

。
③圖3為將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨(dú)或共同轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，據(jù)結(jié)果分析，

（選填“NaPI”或“StpinlA”或“NaPI+StpinlA”）轉(zhuǎn)基因棉花的抗蟲效果最佳，得出該結(jié)論的原因是

。
發(fā)布：2024/11/19 5:30:2組卷：38引用：2難度：0.5
解析

2．某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列，并運(yùn)用交錯(cuò)延伸PCR技術(shù)獲得了抗蟲性能強(qiáng)的重組B基因，轉(zhuǎn)入煙草獲得成功，過程如圖所示。下列選項(xiàng)正確的是（　?。?br />
注：①交錯(cuò)延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動(dòng)子Pr1a可在煙草葉肉細(xì)胞中特異性啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長(zhǎng)素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段，可使植物細(xì)胞合成生長(zhǎng)素。

A．若用EcoRⅠ（5'-G↓AATTC-3'）和限制酶XmaⅠ（5'-G↓CCGGG-3'）雙酶切多個(gè)目的基因，能避免兩個(gè)目的基因連接成環(huán)

B．復(fù)制原點(diǎn)是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)

C．在培養(yǎng)愈傷組織的培養(yǎng)基中添加卡那霉素可以篩選含有Bt重組基因的細(xì)胞

D．圖中生長(zhǎng)素合成酶基因不能促進(jìn)愈傷組織生根

發(fā)布：2024/11/16 21:0:1組卷：36引用：2難度：0.5

解析

3．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?br />

A．若某基因是從人的細(xì)胞內(nèi)提取mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的，則該基因中不含啟動(dòng)子序列

B．?dāng)U增目的基因時(shí)，利用耐高溫的DNA連接酶從引物a、b的3′-端進(jìn)行子鏈合成

C．導(dǎo)入人血清白蛋白基因的綿羊受體細(xì)胞是乳腺細(xì)胞

D．利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將含有目的基因的重組質(zhì)粒整合到植物受體細(xì)胞的染色體DNA上

發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

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限制酶	EcoRⅤ	Sau3AⅠ	BamHⅠ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)	CTA^↓TAG GTA_↑TAG	^↓GATC CATG_↑	G^↓GATCC CCTAG_↑G

3．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ?。?br />

3．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?br />