非人靈長類動物作為腦卒中模型動物,在腦結(jié)構(gòu)和生理上與人類更接近,可提供較常規(guī)嚙齒類模型更多的科學價值。傳統(tǒng)的非人靈長類腦疾病動物模型在研究中經(jīng)常出現(xiàn)操作困難、編輯基因脫靶等問題。對非人靈長類動物的體細胞進行基因編輯,獲得陽性克隆的細胞,利用體細胞核移植技術(shù)構(gòu)建的動物疾病模型具有優(yōu)勢。請回答下列問題:
(1)基因編輯系統(tǒng)由sgRNA和Cas9蛋白組成,當sgRNA與靶DNA上某些序列發(fā)生局部互補結(jié)合時,Cas9蛋白就可以切割DNA。該系統(tǒng)和限制酶都是切割DNA的工具,二者作用的共同特點是
都能夠識別DNA分子的特定核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開
都能夠識別DNA分子的特定核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開
。sgRNA的識別序列越短,基因編輯的脫靶率越高,請分析原因:sgRNA的識別序列短,特異性差,容易與其他片段結(jié)合而造成編輯出錯
sgRNA的識別序列短,特異性差,容易與其他片段結(jié)合而造成編輯出錯
。
(2)將經(jīng)基因編輯的單個體細胞注入 MⅡ期
MⅡ期
(填時期)的去核的卵母細胞中,去核的目的是 使核移植動物模型的核遺傳物質(zhì)全部來自經(jīng)基因編輯的單個體細胞
使核移植動物模型的核遺傳物質(zhì)全部來自經(jīng)基因編輯的單個體細胞
。
(3)用電融合法使兩細胞融合形成重構(gòu)胚,用電刺激、蛋白酶合成抑制劑等方法激活重構(gòu)胚,使其完成 細胞分裂和發(fā)育
細胞分裂和發(fā)育
過程。重構(gòu)胚必須移植到 同種、生理狀態(tài)相同
同種、生理狀態(tài)相同
的雌性個體中才能繼續(xù)發(fā)育。
(4)為獲得更多基因編輯動物模型,可在胚胎移植前對胚胎進行 胚胎分割
胚胎分割
。基因編輯動物模型的遺傳背景保持相同,其優(yōu)點是 有利于減少實驗誤差(或克隆動物能減少個體差異的影響)
有利于減少實驗誤差(或克隆動物能減少個體差異的影響)
。