人體中的碳酸酐酶(CA) 是一種含鋅金屬的酶,迄今在哺乳動(dòng)物體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)至少有11種同工酶。它們的結(jié)構(gòu)、分布、性質(zhì)各異,多與各種上皮細(xì)胞分泌H+和碳酸氫鹽有關(guān),通過(guò)催化CO2水化反應(yīng)及某些酯類(lèi)、醛類(lèi)水化反應(yīng),參與多種離子交換等。
(1)CA作為一種含鋅金屬酶,在不同生物體內(nèi)其結(jié)構(gòu)、分布、性質(zhì)各異。某含260個(gè)氨基酸的CA,以二硫鍵相連的二聚體連接上寡糖鏈的形式存在,則該CA的組成元素是
C、H、O、N、S、Zn
C、H、O、N、S、Zn
,是在細(xì)胞內(nèi)的核糖體中合成后,依次在 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體
的作用下最終錨定于細(xì)胞膜上。
(2)CA主要是催化二氧化碳的可逆水合反應(yīng):CO2+H2O→+H+。由此得出其主要功能有 維持機(jī)體酸堿平衡:幫助人體排出二氧化碳
維持機(jī)體酸堿平衡:幫助人體排出二氧化碳
(至少寫(xiě)出兩點(diǎn))。
(3)CA在眼睛睫狀體上皮細(xì)胞中催化CO2和H2O生成 ,透過(guò)腔膜進(jìn)入房水,由于房水中的液體要保持電中性,導(dǎo)致Na+向房水分泌也增加,同時(shí)帶動(dòng)Cl-向房水移動(dòng),從而使房水形成高滲壓,眼壓升高而形成青光眼。科學(xué)家由此合成了CA抑制劑的多爾唑胺和布林唑胺兩種治療青光眼的滴眼液。據(jù)此從酶的作用機(jī)理角度分析這兩種滴眼液能治療青光眼的原因 多爾唑胺和布林唑胺是CA抑制劑,CA抑制劑使CA降低化學(xué)反應(yīng)活化能的能力下降,從而CA催化生成HCO3減少而降低眼壓
多爾唑胺和布林唑胺是CA抑制劑,CA抑制劑使CA降低化學(xué)反應(yīng)活化能的能力下降,從而CA催化生成HCO3減少而降低眼壓
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(4)碳酸酐酶IX(CAIX) 屬于跨膜蛋白酶,CAIX基因是乏氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)的下游靶基因,乏氧條件能誘導(dǎo)其表達(dá)并且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、治療敏感性及患者預(yù)后相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)CAIX單克隆抗體能在體內(nèi)引起抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用,而用于腫瘤的免疫治療。為制備CAIX單克隆抗體需要大量的CAIX,因此常用基因工程和動(dòng)物細(xì)胞工程獲得CAIX?;蚬こ痰暮诵牟襟E是構(gòu)建基因表達(dá)載體,在該步驟之前需要PCR擴(kuò)增碳酸酐酶IX基因,PCR需要用到引物,引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開(kāi)始連接脫氧核苷酸
使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開(kāi)始連接脫氧核苷酸
??蒲腥藛T將 已被CAIX免疫的B淋巴細(xì)胞
已被CAIX免疫的B淋巴細(xì)胞
與骨髓瘤細(xì)胞融合,再經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)基篩選、克隆化培養(yǎng)和抗CAIX的抗體檢測(cè)
克隆化培養(yǎng)和抗CAIX的抗體檢測(cè)
,獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體 的雜交瘤細(xì)胞,最終獲得CAIX單克隆抗體。