當前新冠病毒的主要檢測手段有核酸檢測法和免疫學檢測法。請回答下列問題:
(1)核酸檢測方法:目前,新冠病毒的實驗室檢測主要依賴核酸檢測,包括以下兩種方法:
①全基因組測序:病原體宏基因組測序(mNGS)是目前臨床實踐中最常用的病原體基因測序方法。mNGS技術首先需要將病毒RNA制備成測序儀可以識別和分析的DNA文庫,需要將RNA
反轉錄
反轉錄
產生的多種互補DNA片段,與 載體
載體
連接后儲存在 受體菌
受體菌
中。然后使用測序儀對核酸序列進行檢測。檢測結果經生物信息學軟件處理,最終展現(xiàn)出與病毒序列相關的信息。
②熒光PCR法:在常規(guī)PCR檢測的基礎上加入了熒光物質,通過監(jiān)測發(fā)光信號來進行分析的一種方法。PCR利用 DNA(雙鏈)復制
DNA(雙鏈)復制
的原理,實現(xiàn)目的基因的擴增,該過程首先需要設計引物,國家微生物科學數據中心公布了新冠病毒S蛋白的引物序列,已知其中一段引物的序列為CCCAACTTCTCCTCCTAGAAT,能否根據該引物序列設計出另一段引物的序列?不能
不能
(填“能”或“不能”),原因是 DNA雙鏈是反向平行的,復制時每條鏈的延伸方向都是5’-3’,該引物只能結合一條鏈的一端,無法據此確定另一引物的堿基序列(已知一端引物的堿基序列無法推斷另一端引物的堿基序列)
DNA雙鏈是反向平行的,復制時每條鏈的延伸方向都是5’-3’,該引物只能結合一條鏈的一端,無法據此確定另一引物的堿基序列(已知一端引物的堿基序列無法推斷另一端引物的堿基序列)
。目前在PCR反應中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是 Taq酶熱穩(wěn)定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活
Taq酶熱穩(wěn)定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活
。TaqMan是最為常用的一種具有熒光標記的核酸探針,能與目標基因特異性結合,利用原理是 堿基互補配對原則
堿基互補配對原則
。
(2)免疫學檢測法:該技術基于血清中抗原和抗體的特異性結合進行檢測。
①制備抗體:可以用到單克隆抗體的相關技術,其過程是取產生免疫反應的 脾(B淋巴)
脾(B淋巴)
細胞與骨髓瘤細胞混合培養(yǎng),使其融合,最后篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞,雜交瘤細胞可以在體外進行大規(guī)模培養(yǎng)或注射到 小鼠腹腔內
小鼠腹腔內
,雜交瘤細胞的培養(yǎng)液中需要特殊的成分,通常需要加入 血清、血漿
血清、血漿
等一些天然成分。
②制備抗原:對新冠病毒的主要結構蛋白基因進行擴增與克隆,構建基因的 表達載體
表達載體
,導入大腸桿菌得到大量相關蛋白,純化后就可以作為抗原進行檢測。