潘老師帶領(lǐng)同學(xué)在暑假以“血紅蛋白的提取和分離”為課題,進(jìn)行了科學(xué)實(shí)踐活動(dòng)。分析并回答下列問(wèn)題:
(1)提取血紅蛋白的實(shí)驗(yàn)材料,選
豬血
豬血
(填“豬血”或“雞血”),因?yàn)?哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞中沒(méi)有細(xì)胞核和各種細(xì)胞器
哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞中沒(méi)有細(xì)胞核和各種細(xì)胞器
。
(2)為了防止血液凝固,在采血容器中要預(yù)先加入 抗凝劑
抗凝劑
。
(3)樣品處理中紅細(xì)胞要 生理鹽水
生理鹽水
洗滌,并采用低速短時(shí)間離心,如此反復(fù)三次,直至 上清液不再呈現(xiàn)黃色
上清液不再呈現(xiàn)黃色
,表明紅細(xì)胞已經(jīng)洗滌干凈。
(4)將洗滌干凈的紅細(xì)胞置于燒杯中,加入 蒸餾水
蒸餾水
和 甲苯
甲苯
使紅細(xì)胞破裂,釋放出血紅蛋白。
(5)通過(guò)粗分離獲得血紅蛋白混合液后,可以用凝膠色譜法進(jìn)一步純化,此方法能分離蛋白質(zhì),根據(jù)的是 相對(duì)分子質(zhì)量的大小
相對(duì)分子質(zhì)量的大小
。
(6)操作時(shí)要注意色譜柱的裝填不得有氣泡。氣泡會(huì) 攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序
攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序
降低分離效果。
(7)某研究人員采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳對(duì)4種不同方法提取出的某蛋白進(jìn)行分離的結(jié)果如圖所示。
①SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)的原理是 SDS所帶負(fù)電荷大大超過(guò)了蛋白質(zhì)原有的電荷量
SDS所帶負(fù)電荷大大超過(guò)了蛋白質(zhì)原有的電荷量
,因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間電荷差別,使電泳的遷移率完全取決于 分子的大小
分子的大小
。
②圖中Marker(標(biāo)樣)所起的作用是 對(duì)照
對(duì)照
,不同的條帶和條帶的深淺分別代表 不同的蛋白質(zhì)和含量的多少
不同的蛋白質(zhì)和含量的多少
。
③據(jù)圖分析,你認(rèn)為最佳提取方法是 2
2
號(hào),因?yàn)?據(jù)圖可知,對(duì)應(yīng)的條帶最多且顏色最深,說(shuō)明該提取方法獲得的蛋白質(zhì)種類和含量最多
據(jù)圖可知,對(duì)應(yīng)的條帶最多且顏色最深,說(shuō)明該提取方法獲得的蛋白質(zhì)種類和含量最多
。