2．圖示PIJ702是一種常用質粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列?；卮鹣铝袉栴}。
表1
| pU702pZHZ8 |
| BglI5.7kb6.7kb |
表2
| 固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） |
0 |
1 |
2 |
5 |
10 |
| 不含質粒的鏈霉菌生長狀況 |
+++++ |
+++ |
+ |
- |
- |
+表示生長；-表示不生長。
（1）限制性核酸內切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的
斷裂，切割形成的末端有
兩種。
（2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進行置換，構建重組質粒pZHZ8。上述兩種質粒經限制酶BglⅡ酶切后所得片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為
kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點的理由是
。
（3）導入目的基因時，首先用Ca
2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細胞，再將重組質粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下可以促進鏈霉菌完成
過程。
（4）不含質粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如表2所示。若要篩選導入pZHZ8的鏈霉菌細胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應在
μg/mL以上，挑選成功導入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是
。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測受體細胞的
（填“DNA”或“RNA”），檢測方法應采用
技術。
