幽門螺桿菌（Hp）是慢性胃炎、淋巴增生性胃淋巴瘤的主要致病菌，該菌的Ipp20基因能合成其特有的蛋白質(zhì)，據(jù)此，研究者利用基因工程制備Hp疫苗。已知Ipp20基因表達時，雙鏈DNA的一條鏈是編碼鏈，另一條鏈是模板鏈，如圖1；四種限制酶及其識別序列如圖2；三種質(zhì)粒如圖3，箭頭表示限制酶的切割位點；操作步驟如圖4。回答下列問題：

（1）Ipp20基因終止子序列位于圖1中的

非編碼區(qū)2

非編碼區(qū)2

區(qū)段，該基因轉(zhuǎn)錄時，編碼起始密碼子的序列位于圖1中的

編碼區(qū)

編碼區(qū)

區(qū)段。
（2）轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA前8個堿基序列為

5′CUCGAGAU

5′CUCGAGAU

（方向為5′→3′）。若通過PCR技術大量擴增Ipp20基因的編碼區(qū)段，則需要設計一對引物，其中結合到編碼鏈上的引物序列是

5′TCTAGAGG

5′TCTAGAGG

（方向為5′→3′，寫出5′端8個堿基序列）。
（3）據(jù)圖1、2、3分析，構建基因表達載體時，應選用的限制酶是

XbaⅠ、XhoⅠ

XbaⅠ、XhoⅠ

，最適合用作載體的質(zhì)粒是

質(zhì)粒Z

質(zhì)粒Z

。
（4）圖4中為篩選出含有目的基因的大腸桿菌，通常采用影印法（使用無菌的線氈布壓在培養(yǎng)基A的菌落上，帶出少許菌種，平移并壓在培養(yǎng)基B上、結果如圖所示）。培養(yǎng)基A、B中應分別添加

潮霉素、氯霉素

潮霉素、氯霉素

，符合實驗要求的菌落是

3、5

3、5

（填寫數(shù)字），判斷依據(jù)是

菌落3、5在含潮霉素培養(yǎng)基中能生長，但在含氯霉素培養(yǎng)基中不能生長，說明含有因插入目的基因而丟失氯霉素抗性基因的重組質(zhì)粒

菌落3、5在含潮霉素培養(yǎng)基中能生長，但在含氯霉素培養(yǎng)基中不能生長，說明含有因插入目的基因而丟失氯霉素抗性基因的重組質(zhì)粒

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