圖1是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程示意圖，載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因（tel′）和氨芐青霉素抗性基因（amp′）。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）EcoRⅤ酶切位點(diǎn)為，EcoRⅤ酶切出來(lái)的線(xiàn)性載體P1為
平
平
末端。
（2）用耐高溫的DNA聚合酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得的目的基因片段，其兩端各自帶有一個(gè)腺嘌呤脫氧核苷酸。載體P1用酶處理，在兩端各添加了一個(gè)堿基為
胸腺嘧啶（T）
胸腺嘧啶（T）
的脫氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在
DNA連接
DNA連接
酶作用下，形成重組質(zhì)粒P3。
（3）篩選含有重組質(zhì)粒P3的菌落首先在含
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養(yǎng)基上進(jìn)行。
（4）為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR鑒定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置，PCR鑒定時(shí)應(yīng)選擇的一對(duì)引物是
乙、丙
乙、丙
。某學(xué)生嘗試用圖中另外一對(duì)引物，從某一菌落的質(zhì)粒中擴(kuò)增出了400bp的片段，原因是
目的基因反向連接
目的基因反向連接
。

【答案】平；胸腺嘧啶（T）；DNA連接；氨芐青霉素；乙、丙；目的基因反向連接

【解答】

【點(diǎn)評(píng)】

聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書(shū)面同意，不得復(fù)制發(fā)布。

發(fā)布：2024/6/11 8:0:9組卷：14引用：1難度：0.6

相似題

1．胰蛋白酶抑制劑（TI）可抑制昆蟲(chóng)蛋白酶活性，阻礙昆蟲(chóng)消化蛋白質(zhì)。鹽藻是一種無(wú)細(xì)胞壁的單細(xì)胞真核綠藻，是能在高鹽條件下生長(zhǎng)的新型生物反應(yīng)器。研究人員利用基因工程技術(shù)構(gòu)建TI基因的表達(dá)載體，并將其導(dǎo)入鹽藻細(xì)胞中，進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）研究人員利用PCR技術(shù)特異性地?cái)U(kuò)增目的基因的前提是需要

，以便合成引物。PCR過(guò)程中溫度的控制至關(guān)重要，將處理溫度控制在90～95℃，是為了

。
（2）獲取目的基因后，為了構(gòu)建基因表達(dá)載體，還需要使用的酶是

（答出2種）。構(gòu)建成功的基因表達(dá)載體應(yīng)含有的結(jié)構(gòu)有目的基因、啟動(dòng)子、

（答出3種）等結(jié)構(gòu)。
（3）研究人員將TI基因?qū)胧荏w細(xì)胞后進(jìn)行了檢測(cè)，相關(guān)步驟和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表所示。該檢測(cè)方法依據(jù)的原理是

。據(jù)表分析，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明

。

組別實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果

① ② ③

轉(zhuǎn)基因鹽藻（A組）離心收集三組細(xì)
胞制備可溶性蛋
白質(zhì)樣品將TI注射到大白
兔體內(nèi)，獲取TI
抗體讓TI抗體和樣品
進(jìn)行混合檢測(cè) 有雜交帶

非轉(zhuǎn)基因鹽藻（B組）無(wú)雜交帶

陽(yáng)性對(duì)照組（C組）有雜交帶

發(fā)布：2024/11/3 15:30:2組卷：5引用：4難度：0.7

A．科學(xué)家已對(duì)Bt基因的序列信息、表達(dá)產(chǎn)物等有了較為深入的了解

B．篩選Bt基因后可以利用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行大量的擴(kuò)增

C．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉的核心工作是將Bt基因?qū)朊藁?xì)胞中

D．檢查轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉是否培育成功首先要進(jìn)行分子水平的檢測(cè)

發(fā)布：2024/11/4 19:0:2組卷：1引用：1難度：0.7

A．DNA連接酶的作用是將兩個(gè)黏性末端的堿基連接起來(lái)

B．目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，受體細(xì)胞即發(fā)生基因突變

C．目的基因與運(yùn)載體結(jié)合的過(guò)程發(fā)生在細(xì)胞外

D．常使用的運(yùn)載體有大腸桿菌、噬菌體和動(dòng)植物病毒等

發(fā)布：2024/11/3 12:0:2組卷：3引用：1難度：0.7

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