乙型腦炎病毒（JEV）是一種RNA病毒，E蛋白參與病毒復制過程。研究人員利用基因重組的方法構建了兩種新型JEV疫苗：DNA疫苗和E蛋白疫苗，其流程如圖所示。請回答下列相關問題：

（1）過程①需要的酶為

逆（反）轉錄酶

逆（反）轉錄酶

。利用PCR技術擴增E蛋白基因的前提是

有一段已知目的基因的（脫氧）核苷酸序列（以便合成引物）

有一段已知目的基因的（脫氧）核苷酸序列（以便合成引物）

，與體內DNA復制相比，利用PCR技術擴增E蛋白基因不需要

解旋

解旋

酶。
（2）若將重組質粒EN導入的受體細胞為大腸桿菌，則通常需要用CaCl₂溶液處理大腸桿菌，使之成為

感受態(tài)

感受態(tài)

細胞。將重組質粒EN導入大腸桿菌后，所形成的E蛋白結構與酵母菌不完全相同，試從細胞結構角度解釋原因

大腸桿菌（是原核生物）無內質網和高爾基體等細胞器（無法對蛋白質進一步加工）

大腸桿菌（是原核生物）無內質網和高爾基體等細胞器（無法對蛋白質進一步加工）

。
（3）E蛋白基因和M質粒結合形成重組質粒EM的過程所涉及的工具酶有限制酶和DNA連接酶，這些工具酶作用的化學鍵為

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

。經過重組質粒EM產生的DNA疫苗進入人體后，會導致機體產生

特異性免疫

特異性免疫

（填“特異性免疫”或“非特異性免疫”），從而達到預防乙型腦炎的目的。