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紅景天中的HMA3基因能編碼Cd轉(zhuǎn)運蛋白，科研人員將紅景天中的HMA3基因轉(zhuǎn)入欒樹，以實現(xiàn)欒樹的定向改良，使其增強對Cd的富集能力，從而更有效治理Cd污染。實驗的主要流程如下，其中Hygr為潮霉素抗性基因，Kanr為卡拉霉素抗性基因，請回答：
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（1）重組質(zhì)粒的構(gòu)建、擴增、保存
①從紅景天細胞中提取總RNA為模板，進行RTPCR。其中PCR的反應條件：98℃10s,55℃30s,72℃1min,35個循環(huán)，其中55℃30s過程稱為
復性
復性
。若模板雙鏈cDNA的數(shù)量為a個，經(jīng)過35個循環(huán)需要消耗引物的數(shù)量是
2a（235-1）
2a（235-1）
。
②為構(gòu)建Cd轉(zhuǎn)運蛋白與綠色熒光蛋白（GFP）的融合蛋白，需確保目的基因與質(zhì)粒正確連接。構(gòu)建重組質(zhì)粒時用
BglⅡ和SpeⅠ
BglⅡ和SpeⅠ
酶切PCR純化產(chǎn)物（已添加相應酶切位點）及Ti質(zhì)粒，然后通過DNA連接酶進行連接制備重組質(zhì)粒，并依次轉(zhuǎn)入大腸桿菌和農(nóng)桿菌。
（2）欒樹愈傷組織的誘導
切割無菌苗將其莖段插入愈傷組織培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應添加
細胞分裂素和生長素
細胞分裂素和生長素
（填植物激素的名稱），放入培養(yǎng)箱，經(jīng)過21d的黑暗誘導，莖段經(jīng)
脫分化
脫分化
形成愈傷組織。
（3）農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化體系的建立
將農(nóng)桿菌單克隆菌株對欒樹愈傷組織進行侵染轉(zhuǎn)化，并用添加
潮霉素
潮霉素
的培養(yǎng)基篩選出轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織，將愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)成完整植株。待幼苗長出較為發(fā)達的根系后進行移栽煉苗，煉苗的目的是
讓其適應野外環(huán)境
讓其適應野外環(huán)境
。
（4）原生質(zhì)體制備及目的基因的檢測和鑒定
①取4g篩選后愈傷組織，用鑷子輕輕搗碎，沖洗。用濾網(wǎng)過濾溶液，將愈傷組織轉(zhuǎn)移至含
纖維素酶和果膠酶
纖維素酶和果膠酶
的酶解液中處理一段時間獲得原生質(zhì)體。
②在激光共聚焦下觀測到細胞膜發(fā)出綠色熒光。在本研究中選擇GFP與Cd轉(zhuǎn)運蛋白構(gòu)建融合蛋白的目的是
通過觀察綠色熒光來確定Cd轉(zhuǎn)運蛋白是否表達以及分布場所
通過觀察綠色熒光來確定Cd轉(zhuǎn)運蛋白是否表達以及分布場所
。若要從個體生物學水平上進行目的基因的檢測與鑒定，則可以檢測比較轉(zhuǎn)基因欒樹與野生型欒樹
Cd的富集能力
Cd的富集能力
。

【答案】復性；2a（235-1）；BglⅡ和SpeⅠ；細胞分裂素和生長素；脫分化；潮霉素；讓其適應野外環(huán)境；纖維素酶和果膠酶；通過觀察綠色熒光來確定Cd轉(zhuǎn)運蛋白是否表達以及分布場所；Cd的富集能力
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：55引用：5難度：0.7
相似題

  • 1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　　）
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    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 2．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細胞
    ⑤目的基因和運載體重組構(gòu)建表達載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復制
    B．規(guī)定擴增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當復制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設計的PCR引物應為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導入受體細胞。載體的化學本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5

  • 3．用限制酶EcoRⅤ單獨切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
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