表面展示技術(shù)是通過(guò)DNA重組技術(shù),將某種蛋白與細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)組裝成融合蛋白,從而將目的基因的表達(dá)產(chǎn)物展示在細(xì)胞表面。如下圖是含有芽孢表面蛋白基因(cotB)與綠色熒光蛋白基因(gfp)的基因表達(dá)載體,Ampr是氨芐青霉素抗性基因?;卮鹣铝袉?wèn)題。
(1)由圖可知,基因表達(dá)載體中cotB基因與基因共用的結(jié)構(gòu)是
啟動(dòng)子和終止子
啟動(dòng)子和終止子
。
(2)將導(dǎo)入基因表達(dá)載體的芽孢桿菌培養(yǎng)在含 氨芐青霉素
氨芐青霉素
的固體培養(yǎng)基上以獲得含有 基因表達(dá)載體
基因表達(dá)載體
的受體細(xì)胞。
(3)將cotB基因與gfp基因重組的目的是 通過(guò)綠色熒光確定融合蛋白成功表達(dá)
通過(guò)綠色熒光確定融合蛋白成功表達(dá)
。
(4)表面展示技術(shù)還能應(yīng)用在釀酒過(guò)程中,將酸性蛋白酶基因(pepA)整合到釀酒酵母的特定基因位點(diǎn),以期在發(fā)酵的過(guò)程中將發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)水解成小分子肽和氨基酸,進(jìn)而降低酒的渾濁度。
①可通過(guò) PCR
PCR
技術(shù)大量擴(kuò)增pepA基因,該技術(shù)是利用 DNA復(fù)制
DNA復(fù)制
的原理。
②從酵母細(xì)胞中獲得質(zhì)粒以構(gòu)建基因表達(dá)載體,質(zhì)粒應(yīng)具備的條件之一是 含有一個(gè)至多個(gè)限制酶酶切位點(diǎn)
含有一個(gè)至多個(gè)限制酶酶切位點(diǎn)
,以便外源基因的插入。
③完成重組后,在對(duì)目的基因的檢測(cè)與鑒定中,需在個(gè)體水平進(jìn)行的鑒定是 檢測(cè)使用轉(zhuǎn)基因釀酒酵母進(jìn)行發(fā)酵比傳統(tǒng)酵母發(fā)酵是否可以降低酒的渾濁度
檢測(cè)使用轉(zhuǎn)基因釀酒酵母進(jìn)行發(fā)酵比傳統(tǒng)酵母發(fā)酵是否可以降低酒的渾濁度
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