血凝素基因(HA)編碼的血凝素是構(gòu)成流感病毒包膜纖突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2兩個(gè)亞單位,其中HA1含有病毒與受體相互作用的位點(diǎn)。人IgG抗體中的一段小肽,常作為融合蛋白標(biāo)簽,由IgGFc基因的片段(長度為717bp)編碼。蛋白質(zhì)分泌依賴于信號肽的引導(dǎo),本研究中用信號肽IL-2SS代替HA自身信號肽,科研人員嘗試構(gòu)建IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表達(dá)載體,并導(dǎo)入大腸桿菌表達(dá)和分泌。請回答下列問題:
(1)流感病毒包膜主要由
蛋白質(zhì)和磷脂
蛋白質(zhì)和磷脂
組成,包膜上血凝素的合成場所在 宿主細(xì)胞的核糖體
宿主細(xì)胞的核糖體
。
(2)本實(shí)驗(yàn)用信號肽IL-2SS代替HA自身信號肽有利于融合蛋白分泌到大腸桿菌細(xì)胞外,PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)應(yīng)該選擇圖中引物 bc
bc
。設(shè)計(jì)引物時(shí),不能包含基因HA1的終止密碼子的編碼序列,原因是 防止產(chǎn)生的HA1上不含IgGFc標(biāo)簽(或防止IgGFc基因不表達(dá))
防止產(chǎn)生的HA1上不含IgGFc標(biāo)簽(或防止IgGFc基因不表達(dá))
。
(3)應(yīng)選擇限制酶 EcoRV
EcoRV
來切割質(zhì)粒A,然后直接將PCR產(chǎn)物與質(zhì)粒A混合,同時(shí)加入 T4
T4
DNA連接酶,使得目的基因與質(zhì)粒A相連。若目的基因與質(zhì)粒A正向連接,用BamH和SacI同時(shí)切割重組質(zhì)粒,完全酶切后的產(chǎn)物中短片段的長度約為 1061
1061
bp。
(4)有時(shí)為了滿足應(yīng)用需要,會在載體中人工構(gòu)建誘導(dǎo)型啟動(dòng)子,當(dāng)誘導(dǎo)物存在時(shí),可以 激活或者抑制目的基因的表達(dá)
激活或者抑制目的基因的表達(dá)
。
(5)圖示中的限制酶有的來自于大腸桿菌,但限制酶不能切割大腸桿菌本身的DNA分子,原因是 本身不具備該酶的識別序列(或識別序列已經(jīng)發(fā)生了甲基化)
本身不具備該酶的識別序列(或識別序列已經(jīng)發(fā)生了甲基化)
。