科學家應用耐鹽堿基因培育出了耐鹽堿水稻新品系，為解決我國糧食問題做出了重要貢獻。已知某耐鹽基因（RST1）一條鏈首端到末端的序列為5′-ATCTACGCGCTCATCCG……CGCAGCAATGAGTAGCG-3′。圖1
為構建重組質粒的過程示意圖，BamHⅠ、BclⅠ和SmaⅠ為限制酶，3種酶的識別序列如表。

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	SmaⅠ
識別序列及切割位點（5'→3'）	G↓GATCC	T↓GATCA	CCC↓GGG

（1）PCR擴增RST1基因時，某同學設計了如下4種PCR引物，其中可選用的引物是

①④

①④

（選填序號）。
①5'-ATCTACGCGCTCATCCG-3'
②5'-GACTACTCGCGCATCTA-3'
③5'-GCGATGAGTAACGACGC-3'
④5'-CGCTACTCATTGCTGCG-3'
（2）為將質粒A和RST1基因正確連接構建重組質粒B，設計RST1基因的引物時，應在兩種引物的5'；端分別添加

BamHⅠ、SmaⅠ

BamHⅠ、SmaⅠ

酶的識別序列，選用

BclⅠ、SmaⅠ

BclⅠ、SmaⅠ

酶切割質粒A。
（3）利用標記基因篩選出成功轉入了重組質粒的受體細胞時，應先在篩選平板甲中添加

四環(huán)素

四環(huán)素

，再將甲平板上長出的菌落通過影印接種法，使甲平板上的菌落位置完全一致地印到添加

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的乙平板上繼續(xù)培養(yǎng)觀察，選出

乙平板對應甲平板不能正常生長（或甲平板上能生長而乙平板上不能生長）

乙平板對應甲平板不能正常生長（或甲平板上能生長而乙平板上不能生長）

的菌落即為所需菌種。
（4）圖2是對重組質粒測序的部分序列，若目的基因與質粒正確連接（啟動子順時針轉錄），則圖中目的基因與質粒連接處的序列正確的是

Q3

Q3

（填序列編號）。