酵母菌絮凝是指菌體細(xì)胞間通過細(xì)胞壁相互粘附、聚集成團的現(xiàn)象。適當(dāng)提高酵母菌的絮凝能力，有助于發(fā)酵后細(xì)胞和產(chǎn)物的分離，節(jié)約生產(chǎn)成本?？蒲腥藛T為了研究R基因?qū)湍妇跄阅艿挠绊懀没蚬こ碳夹g(shù)獲得了R基因敲除的酵母菌菌株，主要步驟如圖1。（注：G基因為抗生素G418抗性基因）。請據(jù)圖1回答下列問題：

（1）過程①采用

PCR

PCR

技術(shù)獲取R基因左右兩端的N片段和C片段，該技術(shù)在目的基因的檢測與鑒定這一步驟中用于檢測

目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞或目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA

目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞或目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA

（寫出一點即可）。
（2）過程②所需的工具酶有

BamHⅠ、HindⅢ、DNA連接酶

BamHⅠ、HindⅢ、DNA連接酶

。過程③將構(gòu)建的重組質(zhì)粒線性化后轉(zhuǎn)化進酵母菌，再利用含

抗生素G418

抗生素G418

的培養(yǎng)基篩選出重組酵母菌，最后挑取單菌落進一步篩選出R基因被敲除的酵母菌。
（3）科研人員繼續(xù)將野生型酵母菌和R基因敲除酵母菌的菌液接種到裝有麥芽汁的錐形瓶中，一定條件下靜置發(fā)酵7天，測定酒精發(fā)酵能力和絮凝能力，結(jié)果如下表。

指標(biāo)種類	酒精發(fā)酵能力	絮凝能力
野生型酵母菌	4.5%	63%
R基因敲除酵母菌	4.5%	83%

據(jù)實驗結(jié)果分析，R基因敲除酵母菌是否更符合生產(chǎn)需求？

是

是

（填“是”或“否”），判斷依據(jù)是

R基因敲除后酵母菌的發(fā)酵能力不變，而絮凝能力增強

R基因敲除后酵母菌的發(fā)酵能力不變，而絮凝能力增強

。
（4）為了進一步研究R基因影響絮凝能力的作用機制，將R基因敲除酵母菌和野生型酵母菌分別用無菌水進行梯度稀釋，再將不同濃度梯度的酵母菌液點樣于含30ug/mL剛果紅（細(xì)胞壁抑制劑，破壞細(xì)胞壁的正常組裝，抑制酵母菌生長）的完全培養(yǎng)基上，培養(yǎng)適當(dāng)時間后觀察到的菌落生長情況如圖2、圖3。
綜合上述實驗結(jié)果，推測R基因敲除酵母菌絮凝能力變化的原因可能是

R基因缺失增強了酵母菌對細(xì)胞壁抑制劑的耐性或R基因缺失減弱細(xì)胞壁抑制劑的危害或R基因敲除使菌株細(xì)胞壁組裝能力提高

R基因缺失增強了酵母菌對細(xì)胞壁抑制劑的耐性或R基因缺失減弱細(xì)胞壁抑制劑的危害或R基因敲除使菌株細(xì)胞壁組裝能力提高

。
（5）若要將R基因敲除菌株應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)制作啤酒，請嘗試提出一個還需要進一步研究的問題：

R基因敲除菌株的食用安全性或R基因敲除菌株的遺傳穩(wěn)定性等

R基因敲除菌株的食用安全性或R基因敲除菌株的遺傳穩(wěn)定性等

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