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現(xiàn)代生物技術(shù)。
吡哆醛激酶（PLK）是維生素B6的關(guān)鍵代謝酶，某研究團隊構(gòu)建了含家蠶PLK基因的重組質(zhì)粒，導入大腸桿菌誘導表達，對所得的產(chǎn)物進行分離純化。
重組質(zhì)粒的構(gòu)建選用了pET-22b（+）質(zhì)粒，圖1為該質(zhì)粒一條鏈的部分序列。各限制酶的識別序列、DNA序列所對應的氨基酸序列均已在圖中標注。
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（1）DNA分子中與mRNA序列一致的鏈稱為編碼鏈，與mRNA序列互補的鏈稱為模板鏈。氨基酸Met的密碼子是AUG，由此可知圖1所示為
編碼鏈
編碼鏈
（編碼鏈/模板鏈）。
（2）該團隊將家蠶PLK基因作為目的基因（圖2），兩端的序列已于圖中標注。為了將圖2所示目的基因插入圖1所示的質(zhì)粒序列，應選用的限制酶是
B
B
。
A.NdeⅠ和HindⅢ
B.NdeⅠ和XhoⅠ
C.SalⅠ和HindⅢ
D.SalⅠ和XhoⅠ
（3）pET-22b（+）質(zhì)粒含有氨芐青霉素的抗性基因，該質(zhì)粒的pelB leader序列可將表達的目的蛋白分泌到細胞外。若按照第（2）題所選的限制酶進行預定操作，下列分析正確的是
BD
BD
。（多選）
A.應選用具有氨芐青霉素抗性的大腸桿菌作為受體菌
B.應選用不具有氨芐青霉素抗性的大腸桿菌作為受體菌
C.大腸桿菌所表達的目的蛋白會被分泌到細胞外
D.大腸桿菌所表達的目的蛋白不會被分泌到細胞外
（4）通過上述方法在大腸桿菌中表達出的吡哆醛激酶，其肽鏈在羧基端有連續(xù)6個氨基酸His（His?Tag），可利用His?Tag與Ni2+之間的親和層析加以純化。此步操作應于何時進行
C
C
。
A.破碎細菌后，過濾前
B.過濾后，加入硫酸銨前
C.加入硫酸銨后，冷凍結(jié)晶前
D.冷凍結(jié)晶后
（5）若以上述工藝流程大規(guī)模生產(chǎn)吡哆醛激酶，涉及生物工程的領域有
ACD
ACD
。（多選）
A.基因工程
B.細胞工程
C.發(fā)酵工程
D.酶工程

【答案】編碼鏈；B；BD；C；ACD
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：20引用：1難度：0.7
相似題

  • 1．用限制酶EcoRⅤ單獨切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　　）

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7

  • 2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 3．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細胞
    ⑤目的基因和運載體重組構(gòu)建表達載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復制
    B．規(guī)定擴增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當復制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設計的PCR引物應為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導入受體細胞。載體的化學本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
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