基因編輯與基因工程
Cre-loxP系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)特定基因的敲除,其技術(shù)過(guò)程如圖1所示。
(1)Cre酶能隨機(jī)識(shí)別DNA分子上的兩個(gè)相同的loxP序列,并在其中的特定位點(diǎn)切斷DNA雙鏈,其功能類(lèi)似于基因工程中的
限制
限制
酶。重新連接切口后,保留圖1中片段 2
2
(填序號(hào)),就能實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因的敲除。
(2)“腦彩虹”是一項(xiàng)最新的大腦成像技術(shù),通過(guò)熒光蛋白“點(diǎn)亮”大腦內(nèi)的神經(jīng)元,幫助科學(xué)家了解大腦。
Ⅰ.研究者設(shè)計(jì)圖2所示的DNA片段。若已知三種熒光蛋白的氨基酸序列,則可通過(guò) 化學(xué)方法人工合成
化學(xué)方法人工合成
的方法獲得相關(guān)基因,再利用限制酶和 DNA連接
DNA連接
酶將三種熒光蛋白基因和兩種loxP序列、啟動(dòng)子M與運(yùn)載體連接,形成重組DNA分子
重組DNA分子
,將其導(dǎo)入小鼠的 受精卵
受精卵
細(xì)胞中,經(jīng)過(guò)篩選、培育,獲得轉(zhuǎn)基因小鼠。
Ⅱ.在Cre酶的幫助下,一些熒光蛋白基因可能會(huì)被隨機(jī)“剪掉”,但兩個(gè)loxP1或兩個(gè)loxP2之間的基因,最多會(huì)被Cre酶敲除一次。同時(shí)該轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞內(nèi)存在連接有啟動(dòng)子N(由信號(hào)分子X(jué)開(kāi)啟)的Cre酶基因,因此該小鼠“腦彩虹”的出現(xiàn)可受X的調(diào)控:
①若無(wú)X作用時(shí),該小鼠腦組織的色彩為 紅
紅
色,其他組織細(xì)胞顏色為 無(wú)
無(wú)
色。
②有信號(hào)分子X(jué)作用時(shí),該小鼠腦組織出現(xiàn)“腦彩虹”,請(qǐng)闡述機(jī)理:有X作用時(shí),該小鼠腦組織細(xì)胞啟動(dòng)Cre酶表達(dá),但不同腦細(xì)胞中Cre酶識(shí)別的loxP序列或作用結(jié)果可能不同有可能隨機(jī)敲除兩個(gè)loxP1之間的紅色熒光蛋白基因,此時(shí)為細(xì)胞為黃色;有可能敲除兩個(gè)loxP2之間的紅色和黃色熒光蛋白基因,此時(shí)為細(xì)胞藍(lán)色;也有可能未成功敲除熒光蛋白基因,此時(shí)為細(xì)胞為紅色。不同腦細(xì)胞差異表達(dá)紅色、黃色或藍(lán)色熒光蛋白基因,出現(xiàn)“腦彩虹”
有X作用時(shí),該小鼠腦組織細(xì)胞啟動(dòng)Cre酶表達(dá),但不同腦細(xì)胞中Cre酶識(shí)別的loxP序列或作用結(jié)果可能不同有可能隨機(jī)敲除兩個(gè)loxP1之間的紅色熒光蛋白基因,此時(shí)為細(xì)胞為黃色;有可能敲除兩個(gè)loxP2之間的紅色和黃色熒光蛋白基因,此時(shí)為細(xì)胞藍(lán)色;也有可能未成功敲除熒光蛋白基因,此時(shí)為細(xì)胞為紅色。不同腦細(xì)胞差異表達(dá)紅色、黃色或藍(lán)色熒光蛋白基因,出現(xiàn)“腦彩虹”
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