新冠病毒是一種單鏈RNA病毒，常用“熒光RT-PCR技術(shù)”（實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）進(jìn)行檢測(cè)，如圖1所示。該過程中當(dāng)TaqMan探針完整時(shí)，熒光基團(tuán)（R）發(fā)出的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)（Q）吸收而不發(fā)熒光；到探針?biāo)忉尫懦鲇坞x的R和Q，R發(fā)出的熒光信號(hào)被相應(yīng)儀器檢測(cè)到，熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物數(shù)量完全同步。請(qǐng)分析并回答下列問題。

（1）“熒光RT-PCR技術(shù)”所用的試劑盒中應(yīng)該含有：檢測(cè)者mRNA、熒光標(biāo)記的新冠病毒核酸探針、

耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）

耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）

、

逆轉(zhuǎn)錄酶

逆轉(zhuǎn)錄酶

、

脫氧核苷酸（dNTP）

脫氧核苷酸（dNTP）

、2種引物、含

Mg²⁺

Mg²⁺

（離子）的緩沖體系。
（2）PCR循環(huán)中，加入的引物作用是

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

。引物、探針與模板結(jié)合發(fā)生在

復(fù)性

復(fù)性

階段。探針核苷酸序列的設(shè)計(jì)依據(jù)是

新冠病毒RNA內(nèi)部的一段核糖核苷酸序列（新冠病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA的部分核糖核苷酸序列）

新冠病毒RNA內(nèi)部的一段核糖核苷酸序列（新冠病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA的部分核糖核苷酸序列）

。
（3）每擴(kuò)增一個(gè)DNA便釋放一個(gè)熒光信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)熒光信號(hào)的積累與PCR產(chǎn)物的完全同步。最終可以得到一條熒光擴(kuò)增曲線，如圖2所示。熒光一般要達(dá)到或超過閾值時(shí)才確診為感染了新冠病毒。現(xiàn)有甲、乙兩個(gè)待檢樣本，檢測(cè)時(shí)都出現(xiàn)了圖示形態(tài)的曲線，但甲的a點(diǎn)比乙的a點(diǎn)明顯左移。在試劑盒合格且正常，操作過程規(guī)范且準(zhǔn)確的前提下，該現(xiàn)象出現(xiàn)的原因是甲樣本中的新病毒含量較

高

高

，達(dá)到視值所需的循環(huán)數(shù)更

少

少

。
（4）常采用

瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖凝膠電泳

來鑒定PCR的產(chǎn)物，設(shè)置如下：1號(hào)泳道為標(biāo)準(zhǔn)（Marker），2號(hào)泳道是為陽性對(duì)照組，3號(hào)泳道為實(shí)驗(yàn)組。圖3中3號(hào)泳道出現(xiàn)雜帶，原因一般有

引物設(shè)計(jì)不合理；復(fù)性溫度偏低；DNA聚合酶的質(zhì)量不好等

引物設(shè)計(jì)不合理；復(fù)性溫度偏低；DNA聚合酶的質(zhì)量不好等

（至少寫出2點(diǎn)）。