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大麗輪枝菌（一種絲狀真菌）是引起棉花黃萎病的主要病原菌。為觀察大麗輪枝菌對棉花根侵染路徑，研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉染大麗輪枝菌，培育出表達綠色熒光蛋白的轉基因菌株，主要過程如圖（圖中a鏈和b鏈分別是相應基因轉錄模板鏈）。分析回答：

（1）過程①中，PCR擴增sGFP的原理是
雙鏈DNA復制
雙鏈DNA復制
，該過程除需要根據(jù)
sGFP兩端（3′端）核苷酸（或堿基）序列
sGFP兩端（3′端）核苷酸（或堿基）序列
設計特異性引物序列外，為保證sCFP正確插入到質粒中，還需要在引物的5ˊ端添加限制酶識別序列，圖中b鏈的黏性末端堿基序列（5ˊ→3ˊ）為
AGCT
AGCT
。
（2）過程①中，若1個sGFP片段連續(xù)擴增4次，則會形成
8
8
個兩條鏈等長的sGFP片段。
（3）過程②需要的工具酶是
DNA連接酶
DNA連接酶
。研究中將sGFP插入到構巢曲霉啟動子和終止子之間的目的是
保證sGFP能在大麗輪枝菌細胞中表達
保證sGFP能在大麗輪枝菌細胞中表達
。
（4）過程③中需要配制細菌培養(yǎng)基，配制時要在培養(yǎng)基滅菌并冷卻到80℃左右后，加入用
無菌水
無菌水
配制的適宜濃度的潮霉素溶液，潮霉素不能與培養(yǎng)基一同滅菌的原因是
潮霉素在滅菌時結構被破壞
潮霉素在滅菌時結構被破壞
。
（5）選擇過程③篩選培養(yǎng)得到的不同農桿菌菌落，分別提取細菌質粒DNA，并用BamHI和HindIII完全酶切后電泳，請在答題紙相應位置畫出可能得到的電泳條帶。
（6）將導入重組質粒的農桿菌加入大麗輪枝菌的孢子細胞懸液中，在適宜條件完成轉染后利用濾膜過濾得到孢子細胞，再在真菌培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得菌落，最終通過檢測
大麗輪枝菌菌絲細胞中綠色熒光強度
大麗輪枝菌菌絲細胞中綠色熒光強度
篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達的大麗輪枝菌。

【考點】基因工程的操作過程綜合．

【答案】雙鏈DNA復制；sGFP兩端（3′端）核苷酸（或堿基）序列；AGCT；8；DNA連接酶；保證sGFP能在大麗輪枝菌細胞中表達；無菌水；潮霉素在滅菌時結構被破壞；大麗輪枝菌菌絲細胞中綠色熒光強度

【解答】

【點評】

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：59引用：2難度：0.6

相似題

1．基因工程在農牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術生產人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />

A．若某基因是從人的細胞內提取mRNA經逆轉錄形成的，則該基因中不含啟動子序列

B．擴增目的基因時，利用耐高溫的DNA連接酶從引物a、b的3′-端進行子鏈合成

C．導入人血清白蛋白基因的綿羊受體細胞是乳腺細胞

D．利用農桿菌轉化法可將含有目的基因的重組質粒整合到植物受體細胞的染色體DNA上

發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

解析

2．經由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
（1）通過上述基因工程技術獲取目標產物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是

（填寫下列編號）。
①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
②選用合適的方法獲取目的基因
③借助發(fā)酵工程規(guī)模化生產目標蛋白
④目的基因導入受體細胞
⑤目的基因和運載體重組構建表達載體
（2）在PCR過程中，引物的功能是

。
A．啟動DNA復制
B．規(guī)定擴增區(qū)間
C．解旋DNA雙鏈
D．充當復制模板

（3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設計的PCR引物應為圖甲中的

。
（4）獲取目的基因后，需要和載體重組導入受體細胞。載體的化學本質是

（填DNA或RNA/DNA或RNA）。
（5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的

。
（6）若目的基因MCO經限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質粒pCLY15（圖丙中圖1）需用

和

切開，才能與MCO片段高效連接。
（7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質粒pCLY15空載還是“滿載”的是

。
A．從抗藥性克隆中提取質粒DNA，用合適的限制酶切割
B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
C．從抗藥性克隆中提取質粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
D．將Ap抗性克隆轉移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別
發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
解析
3．用限制酶EcoRⅤ單獨切割某普通質粒，可產生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。

若用MboⅠ限制酶單獨切割該普通質粒，則產生的DNA片段的長度為（　?。?/h2>
A．2.5和5.5 B．2.5和6 C．5.5和8 D．6和8
發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
解析

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1．基因工程在農牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術生產人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（ ?。?br />

1．基因工程在農牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術生產人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />