人促紅細胞生成素（EPO）是一種可用于治療腎性貧血的糖蛋白類激素，可用乳腺生物反應器生產(chǎn)EPO。科研人員利用大鼠乳清酸蛋白（WAP）基因上游的調(diào)控序列及啟動子和3′UTR序列構建了基因表達載體。構建前，科研人員擴增了WAP基因上游不同長度的片段，將這些片段分別插入EPO基因中，以確定WAP基因啟動子的具體位置。相關信息如圖所示。

（1）為將擴增后的產(chǎn)物定向插入到基因表達載體中，以指導EPO基因的表達，需要在引物末端添加特定的限制酶識別序列。由圖中信息可知，在P1～P4末端添加的序列所對應的限制酶是

ClaⅠ

ClaⅠ

，在A末端添加的序列所對應的限制酶是

MunI

MunI

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（2）將通過PCR處理后的含不同長度的WAP基因上游序列與EPO基因連接，構建成表達載體的過程中，需要

4

4

種限制酶切割上述DNA片段。檢測轉(zhuǎn)基因雌性大鼠時發(fā)現(xiàn)，導入含P1～P3與A擴增產(chǎn)物的個體乳汁中有EPO，而含P4與A擴增產(chǎn)物的個體沒有EPO生成。含P4與A擴增產(chǎn)物的個體沒有EPO生成的原因是

P4與A擴增產(chǎn)物不含完整的WAP基因的啟動子，EPO基因不表達

P4與A擴增產(chǎn)物不含完整的WAP基因的啟動子，EPO基因不表達

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（3）該實驗中，在EPO基因上游插入大鼠WAP基因啟動子的理由是

能使EPO基因在大鼠的乳腺細胞中特異性表達

能使EPO基因在大鼠的乳腺細胞中特異性表達

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（4）科研人員不選用大腸桿菌作為該實驗的受體細胞，從基因表達的角度分析，其原因是

EPO基因是真核生物的基因，該基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA無法在大腸桿菌細胞內(nèi)加工成熟，表達出來的產(chǎn)物不是EPO

EPO基因是真核生物的基因，該基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA無法在大腸桿菌細胞內(nèi)加工成熟，表達出來的產(chǎn)物不是EPO

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