種子大小是作物重要的產(chǎn)量性狀。研究者對野生型擬南芥（2n=10）進行誘變篩選到一株種子增大的突變體。通過遺傳分析和測序，發(fā)現(xiàn)野生型DAI基因發(fā)生一個堿基G到A的替換，突變后的基因為隱性基因，據(jù)此推測突變體的表型與其有關，開展相關實驗?；卮鹣铝袉栴}：
（1）擬采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DAI基因轉(zhuǎn)入突變體植株，用PCR反應擴增DAI基因，用限制性內(nèi)切核酸酶對PCR產(chǎn)物和

載體

載體

進行切割，用DNA連接酶將兩者連接。為確保插入的DAI基因可以正常表達，其上下游序列需具備

啟動子和終止子

啟動子和終止子

。
（2）轉(zhuǎn)化后，T-DNA（其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時不發(fā)生交換）可在基因組單一位點插入也可以同時插入多個位點。在插入片段均遵循基因分離及自由組合定律的前提下，選出單端一位點插入的植株，并進一步獲得目的基因穩(wěn)定遺傳的植株（如圖），用于后續(xù)驗證突變基因與表型的關系。

①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化T₀代植株并自交，將T₁代種子播種在選擇培養(yǎng)基上，能夠萌發(fā)并生長的陽性個體即表示其基因組中插入了

DAI基因和卡那霉素抗性基因

DAI基因和卡那霉素抗性基因

。
②T₁代陽性植株自交所得的T₂代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，選擇陽性率約

75

75

%的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。
③將②中選出的T₂代陽性植株

自交

自交

（填“自交”、“與野生型雜交”或“與突變體雜交”）所得的T₃代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，陽性率達到

100

100

%的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標轉(zhuǎn)基因植株。