S蛋白是新冠病毒(SARS-CoV-2)感染機(jī)體的關(guān)鍵組分,也是研制新冠疫苗的關(guān)鍵起點(diǎn)。如圖為陳薇團(tuán)隊(duì)以缺失 E1等基因的人復(fù)制缺陷腺病毒(E1基因是腺病毒基因組復(fù)制的關(guān)鍵基因)為載體的新冠疫苗研制流程示意圖。
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(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需要插入啟動(dòng)子,啟動(dòng)子的基本組成單位是
脫氧核苷酸
脫氧核苷酸
,能識(shí)別啟動(dòng)子的酶是 RNA聚合酶
RNA聚合酶
。
(2)HEK 細(xì)胞是一種特殊的人胚胎腎源細(xì)胞,在該細(xì)胞中,質(zhì)粒Ⅰ和質(zhì)粒Ⅱ可進(jìn)行同源重組形成含S蛋白基因的復(fù)制缺陷重組腺病毒。為保證上述重組腺病毒能夠大量復(fù)制,HEK細(xì)胞應(yīng)含有 E1
E1
基因及其表達(dá)產(chǎn)物。對(duì)獲得的重組腺病毒除用 PCR 檢測(cè) S 蛋白基因外,還需要用 抗原-抗體雜交
抗原-抗體雜交
的方法檢測(cè)S蛋白。
(3)圖中將含S蛋白基因的復(fù)制缺陷重組腺病毒進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)的操作是 先在體外大量培養(yǎng)HEK 細(xì)胞,然后接種含S蛋白基因的復(fù)制缺陷重組腺病毒,繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間
先在體外大量培養(yǎng)HEK 細(xì)胞,然后接種含S蛋白基因的復(fù)制缺陷重組腺病毒,繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間
。
(4)與復(fù)制型腺病毒相比,利用復(fù)制缺陷重組腺病毒為載體制各成的疫苗具有更高的安全性,其原因是 該疫苗不會(huì)在人體細(xì)胞中復(fù)制
該疫苗不會(huì)在人體細(xì)胞中復(fù)制
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