國家相關(guān)標準規(guī)定，一次性衛(wèi)生筷中不得檢測出大腸桿菌，但“衛(wèi)生筷不衛(wèi)生”的現(xiàn)象時有發(fā)生，于是某生物興趣小組對某餐館衛(wèi)生筷做抽樣檢測，實驗過程如下：
第一步：從餐館取回一雙衛(wèi)生筷，在實驗室的超凈工作臺中撕去包裝袋，稱取筷子1g后用99mL無菌水浸泡，制得提取液；
第二步：配制伊紅美藍培養(yǎng)基，倒平板；
第三步：取10mL提取液進行梯度稀釋，稀釋倍數(shù)為10¹～10⁵，每個濃度接種3個平板，每個平板接種稀釋液0.1mL。另取兩個平板，一個不進行接種（陰性對照），一個接種大腸桿菌（陽性對照）﹔
第四步：在適宜溫度下培養(yǎng)48h,統(tǒng)計菌落數(shù)目。
實驗過程中對大腸桿菌的培養(yǎng)符合相關(guān)操作要求，回答下列問題。
（1）第一步中的稱取過程應(yīng)在

酒精燈火焰

酒精燈火焰

旁進行，以避免來自環(huán)境的雜菌污染。
（2）第二步中，應(yīng)在調(diào)節(jié)pH、滅菌、冷卻后，再向培養(yǎng)基中加入滅菌的乳糖、伊紅美藍溶液，搖勻后倒平板。該過程至少需制備

17

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個平板。培養(yǎng)基的滅菌方法為

高壓蒸汽滅菌法

高壓蒸汽滅菌法

。乳糖可作為培養(yǎng)基配方中的

碳源（和能源）

碳源（和能源）

物質(zhì)。對培養(yǎng)基滅菌后再加入乳糖，原因是

乳糖高溫會分解

乳糖高溫會分解

。
（3）第三步的接種方法名稱是

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

。
（4）培養(yǎng)結(jié)果均無黑色菌落，但不能說明該餐館的衛(wèi)生筷均合格，原因是

只檢測了大腸桿菌，未對其他菌種進行檢測（僅僅對一雙筷子進行檢測，樣品太少不具有說服力）

只檢測了大腸桿菌，未對其他菌種進行檢測（僅僅對一雙筷子進行檢測，樣品太少不具有說服力）

（答出1點即可）。
（5）若培養(yǎng)結(jié)果中除了黑色菌落，還有其他菌落存在，說明

在接種時有雜菌污染，衛(wèi)生筷上存在多種菌

在接種時有雜菌污染，衛(wèi)生筷上存在多種菌

。