I、當(dāng)前新冠疫情仍在全球蔓延。疫苗的研制和快速準(zhǔn)確的檢測技術(shù)是應(yīng)對疫情的有力措施?；卮鹣铝袉栴}。
（1）腺病毒是研制疫苗的常用載體，圖1是構(gòu)建含新冠病毒S蛋白（抗原）基因的重組腺病毒表達(dá)載體示意圖。

①以病毒作為基因工程的載體，其優(yōu)點是可以利用病毒具有

侵染

侵染

的特點，易將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。圖1中構(gòu)建的腺病毒表達(dá)載體需含有S蛋白基因、標(biāo)記基因、

啟動子、終止子

啟動子、終止子

等組件。
②圖1中四種限制酶的切割位點和識別序列如下表所示，構(gòu)建腺病毒表達(dá)載體時需使用限制酶

NcoI

NcoI

和

BamHI

BamHI

切割腺病毒基因和新冠病毒的S蛋白基因，選用這兩種限制酶切割的主要原因是

防止自身環(huán)化及目的基因反向連接

防止自身環(huán)化及目的基因反向連接

（答出1點即可）。

限制酶	NcoI	SphI	NheI	BamHI
識別序列和切割位點	C↓CATGGG	CATG↓C	G↓CTAGC	G↓GATCC

（2）臨床上常采用RT-PCR技術(shù)，對受測者咽拭子取樣后進(jìn)行新冠病毒核酸檢測。RT-PCR是指以病毒的RNA為模板合成cDNA，并對cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增的過程。在此過程中，需要用Taq酶和

逆轉(zhuǎn)錄酶

逆轉(zhuǎn)錄酶

酶，其中PCR過程需要

四種脫氧核糖核苷酸

四種脫氧核糖核苷酸

原料。
II、為了定量測定樣品中病毒核酸，常采用實時熒光PCR擴(kuò)增技術(shù)，該技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，需額外添加熒光標(biāo)記探針（每個目的基因結(jié)合1分子探針）。當(dāng)探針完整時，不產(chǎn)生熒光，當(dāng)探針被Taq酶水解時，R與Q分離，可檢測到R發(fā)出的熒光，如圖2所示。
（3）若樣本中含有目的基因，引物和探針與目的基因通過形成

氫鍵

氫鍵

（化學(xué)鍵）特異性結(jié)合。據(jù)圖2分析，探針的水解，發(fā)生在PCR過程

延伸

延伸

階段。
（4）在熒光定量PCR技術(shù)中，Ct值的含義是“每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)”，據(jù)此分析，當(dāng)樣本中初始模板越多，Ct值就

越?。ㄔ降停?/div>

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（5）若每分子探針?biāo)忉尫诺腞基團(tuán)熒光強度為a,加入模板DNA數(shù)為b,則反應(yīng)體系中熒光信號強度（Rn）與擴(kuò)增次數(shù)（n）之間的關(guān)系為：Rn=

ab（2ⁿ-1）

ab（2ⁿ-1）

。