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研究者將釀酒酵母S288c的APAl基因與EGFP（增強型綠色熒光蛋白）基因構(gòu)成融合基因，并進一步構(gòu)建表達載體（如圖甲所示）。以該載體為模板，再通過PCR介導(dǎo)的定點突變技術(shù)向APAl基因中分別引入突變位點，經(jīng)典的大引物PCR定點誘變技術(shù)成為基于PCR技術(shù)的定點誘變技術(shù)中應(yīng)用最普遍的方法，操作過程如圖乙所示，其中引物箭頭代表子鏈延伸方向?；卮鹣铝袉栴}：
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（1）構(gòu)建表達載體時，應(yīng)將融合基因放于
啟動子
啟動子
、
終止子
終止子
等結(jié)構(gòu)之間，以保證目的基因的轉(zhuǎn)錄。為實現(xiàn)質(zhì)粒和融合基因的高效連接，切割質(zhì)粒時選用限制酶XmaⅠ而不選用限制酶SmaⅠ的原因是
SmaI的酶切末端為平末端，無法與融合基因上的黏性末端連接
SmaI的酶切末端為平末端，無法與融合基因上的黏性末端連接
。為將融合基因構(gòu)建在質(zhì)粒上，還需要
BglII、DNA連接酶
BglII、DNA連接酶
等酶。
（2）利用大引物PCR進行定點誘變需要進行兩輪PCR（PCR1和PCR2）。在PCR1中，至少需要
2
2
個循環(huán)才能獲得相應(yīng)的大引物模板。在PCR2中？處的引物應(yīng)選用大引物兩條鏈中的
②
②
（填“①”或“②”）鏈的子鏈。
（3）若在熒光顯微鏡下觀察到受體細(xì)胞有綠色熒光，則表明
APAl基因與EGFP基因已經(jīng)表達（或融合基因形成了蛋白質(zhì)產(chǎn)物）
APAl基因與EGFP基因已經(jīng)表達（或融合基因形成了蛋白質(zhì)產(chǎn)物）
，EGFP基因的作用是
作為標(biāo)記基因，用于目的基因的檢測和鑒定
作為標(biāo)記基因，用于目的基因的檢測和鑒定
。

【答案】啟動子；終止子；SmaI的酶切末端為平末端，無法與融合基因上的黏性末端連接；BglII、DNA連接酶；2；②；APAl基因與EGFP基因已經(jīng)表達（或融合基因形成了蛋白質(zhì)產(chǎn)物）；作為標(biāo)記基因，用于目的基因的檢測和鑒定
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：24引用：3難度：0.6
相似題

  • 1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 2．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標(biāo)蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
    ⑤目的基因和運載體重組構(gòu)建表達載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當(dāng)復(fù)制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應(yīng)中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5

  • 3．用限制酶EcoRⅤ單獨切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
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