生物柴油作為新型能源已經成為世界上應用最廣泛、發(fā)展迅猛的可再生能源之一。研究人員利用基因工程的方法，將油料作物紫蘇的產油基因DGAT1與含有氨芐青霉素抗性基因的pMD克隆質粒構建pMD—DGAT1重組質粒，然后導入大腸桿菌擴大培養(yǎng)；再提取出擴增的pMD—DGAT1克隆質粒，與pBI121空載體同時用XbaI、BamH I兩種酶酶切，構建pBI121—DGAT1表達載體：最后將表達載體導入四尾柵藻獲得產油微藻，利用地熱廢水培養(yǎng)產油微藻不僅能生產生物柴油，還能治理地熱廢水。
（1）提取紫蘇組織細胞RNA經過
逆轉錄
逆轉錄
得到cDNA，再利用PCR技術擴增得到DGAT1基因。在PCR擴增之前，需要對DGAT1基因進行一次預變性的目的是提高DGAT1基因的變性概率
提高DGAT1基因的變性概率
；在擴增DGAT1基因時，需要根據DGAT1基因兩端核苷酸序列
DGAT1基因兩端核苷酸序列
設計特異性引物序列。
（2）在配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時，要在培養(yǎng)基滅菌并冷卻到30℃左右后，加入用無菌水配制的適宜濃度的氨芐青霉素溶液，氨芐青霉素不能與培養(yǎng)基一同滅菌的原因可能是高溫會破壞氨芐青霉素的結構而導致失效
高溫會破壞氨芐青霉素的結構而導致失效
。
（3）將DGAT1基因插入到pBI121空載體的啟動子與終止子之間的目的是保證DGAT1基因能在產油微藻細胞中表達
保證DGAT1基因能在產油微藻細胞中表達
。若用DGAT1基因探針檢測產油微藻，能檢測到細胞中的DGAT1基因及其轉錄出的mRNA
DGAT1基因及其轉錄出的mRNA
；判斷產油微藻細胞中DGAT1基因是否成功表達，需要加入DGAT1抗體
DGAT1抗體
進行檢測。
（4）為檢測產油微藻對地熱廢水的去污能力，研究人員設計實驗并得到相應實驗結果如表。
| 指標 |
總氮（mg/L） |
總磷（mg/L） |
氟化物（mg/L） |
| 廢水培養(yǎng)基 |
23.2 |
4.32 |
4.56 |
| 培養(yǎng)轉基因產油微藻11天后 |
1.9 |
0.45 |
0.84 |
該實驗不能說明產油微藻顯著提高了去污能力。請進一步完善實驗設計：
添加用地熱廢水培養(yǎng)四尾柵藻的對照組，11天后檢測總氮、總磷和氟化物的含量
添加用地熱廢水培養(yǎng)四尾柵藻的對照組，11天后檢測總氮、總磷和氟化物的含量
。
