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生長素參與植物生長發(fā)育的調(diào)節(jié)，生長素運(yùn)輸?shù)鞍祝≒INI）對IAA的極性運(yùn)輸具有重要作用。為研究35S啟動子（一種來自病毒的強(qiáng)啟動子）能否引起下游基因的過量表達(dá)，研究人員將35S啟動子與PINI基因轉(zhuǎn)入擬南芥，觀察PINI過量表達(dá)對植物的影響。
（1）獲取PINI基因的mRNA后，通過RTPCR擴(kuò)增獲取PINI基因（DNA）時(shí)所需要的酶是
逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶
逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶
。每次PCR循環(huán)分為3步，其中所需溫度最低的一步稱為
復(fù)性
復(fù)性
。
（2）PINI基因不能直接導(dǎo)入受體細(xì)胞，需要構(gòu)建PINI表達(dá)載體。構(gòu)建PINI表達(dá)載體的目的是
保證PINI在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)
保證PINI在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)
。
（3）為將PINI基因以正確方向插入質(zhì)粒需要雙酶切。在設(shè)計(jì)引物時(shí)，需在引物的5'端加入相應(yīng)的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖1分析，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)選用的限制酶是
EcoRⅠ和PstⅠ
EcoRⅠ和PstⅠ
。
菁優(yōu)網(wǎng)
（4）提取轉(zhuǎn)基因擬南芥的DNA，用相應(yīng)引物擴(kuò)增出35S啟動子和PINI基因，為檢測目的基因是否導(dǎo)入擬南芥，應(yīng)電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的
35S
35S
，不檢測另一種的原因是
啟動子
啟動子
。據(jù)圖2可知，也可在個(gè)體水平上進(jìn)行檢測，方法是
本實(shí)驗(yàn)的目的是要探究PINI過量表達(dá)對植物的影響，因此需要首先確定35S是否存在使用除草劑來檢測轉(zhuǎn)基因植物對除草劑的抗性
本實(shí)驗(yàn)的目的是要探究PINI過量表達(dá)對植物的影響，因此需要首先確定35S是否存在使用除草劑來檢測轉(zhuǎn)基因植物對除草劑的抗性
。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶；復(fù)性；保證PINI在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)；EcoRⅠ和PstⅠ；35S；啟動子；本實(shí)驗(yàn)的目的是要探究PINI過量表達(dá)對植物的影響，因此需要首先確定35S是否存在使用除草劑來檢測轉(zhuǎn)基因植物對除草劑的抗性
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/20 8:0:9組卷：6引用：2難度：0.5
相似題

  • 1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 2．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進(jìn)行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標(biāo)蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
    ⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當(dāng)復(fù)制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計(jì)的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中，溫度隨時(shí)間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實(shí)驗(yàn)操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進(jìn)行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5

  • 3．用限制酶EcoRⅤ單獨(dú)切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個(gè)堿基對）的長鏈，而同時(shí)用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個(gè)黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨(dú)切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
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