漆酶降解木質(zhì)素能力較強,在紙漿生物漂白、廢水處理、苯氧基類除草劑去毒等領(lǐng)域具有廣泛的研究和應(yīng)用價值。實際應(yīng)用于生產(chǎn)的漆酶主要來源于白腐真菌,從白腐真菌中篩選出高產(chǎn)漆酶菌株對實現(xiàn)木質(zhì)素的降解至關(guān)重要。請回答下列問題:
液體培養(yǎng)基:以木質(zhì)素為唯一碳源。
固體培養(yǎng)基:主要成分有馬鈴薯浸出液、葡萄糖、瓊脂、愈創(chuàng)木酚(漆酶可將其催化成一種紅褐色物質(zhì))
(1)研究人員從不同環(huán)境地表上采集土壤、腐爛的樹枝等接種到液體培養(yǎng)基,在28℃條件下?lián)u床培養(yǎng)。
①液體培養(yǎng)基常采用
高壓蒸汽滅菌
高壓蒸汽滅菌
的方法進行滅菌。搖床培養(yǎng)的目的是 增加溶液中的氧氣以滿足菌株的細胞呼吸的需求,使菌株與溶液成分接觸更均勻
增加溶液中的氧氣以滿足菌株的細胞呼吸的需求,使菌株與溶液成分接觸更均勻
。
②取培養(yǎng)液1mL采用 稀釋涂布平板法
稀釋涂布平板法
接種于固體選擇培養(yǎng)基于28℃恒溫箱倒置培養(yǎng)。實驗結(jié)果見圖。
選擇菌落 菌落C
菌落C
作為高產(chǎn)漆酶菌株,理由是 菌落A周圍沒有出現(xiàn)紅褐色圈,說明不能分泌漆酶;菌落B、C周圍均出現(xiàn)紅褐色圈且大小相似,但由于菌落C直徑小于菌落B,說明菌落C分泌的漆酶數(shù)量多和活性強,因此選擇菌落C
菌落A周圍沒有出現(xiàn)紅褐色圈,說明不能分泌漆酶;菌落B、C周圍均出現(xiàn)紅褐色圈且大小相似,但由于菌落C直徑小于菌落B,說明菌落C分泌的漆酶數(shù)量多和活性強,因此選擇菌落C
。
(2)實際生產(chǎn)中,通過培養(yǎng)白腐真菌獲取的漆酶蛋白往往與其它物質(zhì)混合在一起。因此,得到漆酶的粗提取物后,先要通過 透析
透析
和 凝膠色譜法
凝膠色譜法
法進行純化,再通過 電泳
電泳
鑒定漆酶的純度。
(3)游離的漆酶穩(wěn)定性差,在環(huán)境中易受溫度、pH等因素的影響,且不易分離和回收,這在一定程度上限制了漆酶的工業(yè)化應(yīng)用。請根據(jù)所學知識提出一項解決措施:利用固定化技術(shù)固定白腐真菌細胞(或固定漆酶)
利用固定化技術(shù)固定白腐真菌細胞(或固定漆酶)
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