生物科技廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，以改善農(nóng)作物品質(zhì)、提高產(chǎn)量。植物成熟果實(shí)細(xì)胞中會(huì)表達(dá)大量的半乳糖醛酸酶（PG），導(dǎo)致成熟果實(shí)易于損傷。科學(xué)家利用番茄的PG基因構(gòu)建反義PG基因表達(dá)載體，導(dǎo)入番茄細(xì)胞，培育出轉(zhuǎn)基因延熟番茄。圖甲是反義PG基因的作用機(jī)理，圖乙是質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖及相應(yīng)的酶切位點(diǎn)。回答下列問(wèn)題。

（1）從番茄細(xì)胞中提取PG基因轉(zhuǎn)錄的mRNA，經(jīng)過(guò)

逆轉(zhuǎn)錄（或反轉(zhuǎn)錄）

逆轉(zhuǎn)錄（或反轉(zhuǎn)錄）

產(chǎn)生cDNA，再用

PCR

PCR

技術(shù)體外擴(kuò)增。該技術(shù)需先設(shè)計(jì)合成

引物

引物

，并使用

熱穩(wěn)定性DNA聚合（Taq）

熱穩(wěn)定性DNA聚合（Taq）

酶來(lái)催化。
（2）構(gòu)建反義PG基因表達(dá)載體時(shí)需在啟動(dòng)子和終止子之間反向插入PG基因。為使目的基因與質(zhì)粒正確連接，并提高兩者重組的成功率，需在擴(kuò)增的目的基因兩端分別引入

BamHI和EcoRI

BamHI和EcoRI

（填“EcoRⅠ和EcoRⅠ”“BamHⅠ和BamHⅠ”或“BamHⅠ和EcoRⅠ”）限制酶的識(shí)別序列。質(zhì)粒上有標(biāo)記基因，利用抗生素可篩選出含質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞，方法是

將待篩選的宿主細(xì)胞接種到含該抗生素的培養(yǎng)基中，能夠生長(zhǎng)的是含有質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞

將待篩選的宿主細(xì)胞接種到含該抗生素的培養(yǎng)基中，能夠生長(zhǎng)的是含有質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞

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（3）用含反義PG基因的農(nóng)桿菌侵染番茄細(xì)胞，再通過(guò)

植物組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)

技術(shù)培育出轉(zhuǎn)基因番茄。在轉(zhuǎn)基因番茄中，反義PG基因能抑制PG合成的原因是阻斷了

PG基因表達(dá)過(guò)程中的翻譯階段

PG基因表達(dá)過(guò)程中的翻譯階段

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