(一)草莓是春節(jié)市場上非常受歡迎的一種水果,但卻存在易腐爛,難保存的問題。某科研團隊為了確定腐爛草莓上的菌種類型和探究草莓的新產業(yè)開發(fā)模式,進行了以下一系列的研究。請回答:
(1)科研團隊用棉簽刮取腐爛的草莓表面,然后用
無菌水
無菌水
沖洗棉簽獲得菌懸液,然后利用 稀釋涂布平板法/涂布分離
稀釋涂布平板法/涂布分離
法將其接種至LB固體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)基中出現了均勻分布的單菌落。
(2)腐爛的草莓非常軟爛,原因是微生物產生的 果膠酶
果膠酶
作用后使草莓組織更加松散。為了獲得使草莓變軟的微生物,用接種環(huán)分別刮取LB培養(yǎng)基上菌落的菌種,接種到 以果膠為唯一碳源的
以果膠為唯一碳源的
培養(yǎng)基上,發(fā)現了以下兩種情況:
①LB培養(yǎng)基中的菌落數量和種類更多,原因是 草莓腐爛處的微生物并非都能產生果膠酶
草莓腐爛處的微生物并非都能產生果膠酶
。
②后者培養(yǎng)基上的菌落與在LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)時相比,生長狀況不盡相同,可能原因是 菌種對營養(yǎng)物質的需求不同,導致生長狀況不同
菌種對營養(yǎng)物質的需求不同,導致生長狀況不同
。
(3)科研團隊為了制成草莓果酒,將草莓放入榨汁機制成黏稠的果醬,然后接種釀酒酵母進行發(fā)酵,結果發(fā)現酒精含量低,且極易造成污染??梢詫⒐u進行 稀釋和殺菌/滅菌
稀釋和殺菌/滅菌
處理后再用于發(fā)酵。
(二)某種植物的根會產生一種次生代謝產物,該次生代謝產物具有很高的藥用價值。在研究這種次生代謝產物合成的分子機制時發(fā)現,基因A表達沉默時才能產生,且有物質甲存在時會使基因A表達。物質甲在環(huán)境中非常常見,為了實現基因A的沉默,現設計將基因A反向連接到植物基因組中?;駻與Ti質粒結構如下圖所示,箭頭表示轉錄方向。
(4)為了使基因A反向連接到Ti質粒上,選用EcoRI和BamHI酶進行切割并分離獲得A基因,然后加入 DNA連接酶
DNA連接酶
形成重組Ti質粒。為了保證重組Ti質粒在農桿菌中的穩(wěn)定存在,需將工程發(fā)根農桿菌進行 除去EcoRⅠ和BamHⅠ酶/限制酶/EcoRⅠ和BamHⅠ酶基因/限制酶基因
除去EcoRⅠ和BamHⅠ酶/限制酶/EcoRⅠ和BamHⅠ酶基因/限制酶基因
處理。
(5)將含有重組T質粒的發(fā)根農桿菌與經過創(chuàng)傷處理的外植體共同培養(yǎng)一段時間,然后進行 除菌(不能填滅菌)
除菌(不能填滅菌)
后,在培養(yǎng)基中加入 潮霉素
潮霉素
以篩選出成功導入基因A片段的植物細胞。再轉移至含有 適當配比的營養(yǎng)物質和植物生長調節(jié)劑
適當配比的營養(yǎng)物質和植物生長調節(jié)劑
的培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到愈傷組織。結果發(fā)現未更換培養(yǎng)基的情況下,就長出了較多的根,可能原因是發(fā)根農桿菌的T-DNA中含有 生長素合成酶/生長素合成相關
生長素合成酶/生長素合成相關
基因。
(6)為了檢驗轉基因是否成功,應在 含
含
(填“含”或“不含”)物質甲的培養(yǎng)液中將獲得的根進行水培,發(fā)現只有部分能產生目標次生代謝產物。部分根無法產生次生代謝產物的可能原因是 反接的基因A未成功表達
反接的基因A未成功表達
。