與棉花發(fā)育相關(guān)的GhMADS12基因能調(diào)節(jié)棉花根、莖、葉、花的發(fā)育和果實(shí)的成熟?？茖W(xué)家將克隆得到的GhMADS12基因與運(yùn)載體結(jié)合構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程如圖所示。請(qǐng)回答下列問題：

（1）若用PCR技術(shù)擴(kuò)增GhMADS12基因，需要在PCR儀中加入

2

2

種引物，引物的作用是

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始復(fù)制

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始復(fù)制

。除了引物、DNA模板之外，PCR反應(yīng)體系中還需提供

Taq酶、dNTP

Taq酶、dNTP

。（至少答2條）
（2）GhMADS12 和pBI121質(zhì)粒T-DNA經(jīng)限制酶SmaⅠ和XbaⅠ切割斷開的化學(xué)鍵是

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

。原核生物中的限制酶不切割自身DNA的原因是

不具有切割自身DNA的限制酶或?qū)A基序列甲基化，使限制酶無(wú)法識(shí)別

不具有切割自身DNA的限制酶或?qū)A基序列甲基化，使限制酶無(wú)法識(shí)別

。
（3）圖中的CaMV35S為啟動(dòng)子，GUS為標(biāo)記基因，NOS為終止子，據(jù)圖分析，目的基因GhMADS12插入的具體位點(diǎn)是

B

B

。
A.啟動(dòng)子的上游
B.啟動(dòng)子的下游，終止子的上游
C.終止子的下游
D.任意位點(diǎn)
（4）ChMADS12基因進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞并在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為

轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化

，該過程常用Ca²⁺處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于能吸收周圍DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為

感受態(tài)細(xì)胞

感受態(tài)細(xì)胞

。