乳酸菌在細胞代謝過程中會分泌細菌素、有機酸等物質(zhì)，細菌素對多種食品中常見的致病菌具有廣譜的抑菌活性。實驗小組為了檢測細菌素的抗菌活性，將富集培養(yǎng)后的乳酸菌菌株分離純化，并接種到MRS液體培養(yǎng)基中?；卮鹣铝袉栴}：
（1）純化乳酸菌可以用平板劃線法，該方法所用的接種工具是

接種環(huán)

接種環(huán)

，對該工具進行滅菌的方法是

灼燒滅菌

灼燒滅菌

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（2）利用平板劃線法純化乳酸菌時，第二次及其后的劃線都要從上一次劃線的

末端

末端

開始，目的是

使細菌數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，便于獲得單菌落

使細菌數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，便于獲得單菌落

。平板劃線法不能用于微生物的計數(shù)，其原因是

平板劃線法只在劃線末端出現(xiàn)單菌落，不能統(tǒng)計出單菌落數(shù)

平板劃線法只在劃線末端出現(xiàn)單菌落，不能統(tǒng)計出單菌落數(shù)

。
（3）用打孔法測定乳酸菌分泌的細菌素對指示菌的抑菌效果時，應(yīng)該先吸取稀釋的

指示菌

指示菌

菌液涂布到平板中，再使用5mm直徑的打孔器打孔，每孔分別注入離心后的50μLMRS液體培養(yǎng)基的

上清液

上清液

（填“上清液”或“沉淀物”）。培養(yǎng)24h后測定抑菌圈的直徑，當(dāng)抑菌圈的直徑至少大于

5mm

5mm

才能判斷為具有抑菌活性。
（4）實驗小組用經(jīng)乳酸調(diào)節(jié)pH至3.5（與發(fā)酵48h后發(fā)酵液的pH相同）的MRS液體培養(yǎng)基作為空白對照組，觀察其抑菌情況。設(shè)置該組實驗的目的是

排除有機酸對細菌的抑制作用

排除有機酸對細菌的抑制作用

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