“多發(fā)性骨性連接綜合征”是由編碼成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF9）的基因突變所致，患者FGF9基因中某堿基對(duì)發(fā)生替換，使FGF9中相應(yīng)的氨基酸發(fā)生替換?？蒲腥藛T欲利用基因工程等技術(shù)獲得含有該突變基因的模型小鼠，用來(lái)研究該病的發(fā)病機(jī)理。圖1表示FGF9cDNA（由FGF9基因轉(zhuǎn)錄得到的mRNA逆轉(zhuǎn)錄而來(lái)）進(jìn)行定點(diǎn)突變得到突變型FGF9cDNA的流程，圖2為研究中所用的質(zhì)粒（SpeⅠ、HindⅢ、SmalⅠ和BglⅡ分別代表相應(yīng)的限制酶切割位點(diǎn)，以上限制酶切割產(chǎn)生的粘性末端不同）。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）圖1虛線方框中的a鏈與d鏈在延伸過(guò)程中的作用是：既可作為

模板

模板

又可以起到相當(dāng)于

引物

引物

的作用，使

耐高溫的DNA聚合

耐高溫的DNA聚合

酶能夠從a鏈與d鏈的3’端開(kāi)始連接脫氧核苷酸。經(jīng)PCR后獲得的產(chǎn)物一般通過(guò)

瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖凝膠電泳

來(lái)鑒定。
（2）基因王程操作的核心步驟是

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

。圖2質(zhì)粒中的C序列是

啟動(dòng)子

啟動(dòng)子

，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。圖1中突變型FGF9cDNA的a鏈所在的DNA單鏈為轉(zhuǎn)錄的模板鏈，則引物1和引物4的5'端需分別添加

HindⅢ和SpeⅠ

HindⅢ和SpeⅠ

酶的識(shí)別序列，才能與圖2中的質(zhì)粒正確連接。
（3）將構(gòu)建的重組DNA分子通過(guò)

顯微注射

顯微注射

技術(shù)導(dǎo)入受精卵，再經(jīng)

胚胎移植

胚胎移植

（答1點(diǎn)即可）等技術(shù)使其發(fā)育成模型小鼠。
（4）科研人員發(fā)現(xiàn)，已轉(zhuǎn)入突變型FGF9cDNA的模型小鼠并未表現(xiàn)出“多發(fā)性骨性連接綜合征”，從分子水平上尋找原因需采用的技術(shù)有

PCR、抗原-抗體雜交技術(shù)

PCR、抗原-抗體雜交技術(shù)

。（答出2點(diǎn)）