透明顫菌血紅蛋白基因vgb表達(dá)產(chǎn)物VHb蛋白能使其在低氧的環(huán)境中生長(zhǎng)良好。頂頭孢霉是好氧性真菌，其發(fā)酵產(chǎn)物頭孢菌素C有很大的市場(chǎng)需求量，但低氧環(huán)境影響其產(chǎn)量，傳統(tǒng)發(fā)酵生產(chǎn)的增氧成本高。為提高產(chǎn)量科研人員將透明顫菌血紅蛋白基因vgb基因和頂頭孢霉pcpC啟動(dòng)子進(jìn)行PCR拼接，并與質(zhì)粒1構(gòu)建重組質(zhì)粒，如圖。

注：hph是潮霉素抗性基因，Vgb基因與hph基因共用終止子。
回答下列問(wèn)題：
（1）PCR過(guò)程需要設(shè)計(jì)引物，引物的作用是

使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸

。
（2）據(jù)圖所示，重疊延伸PCR拼接時(shí)，若啟動(dòng)子啟動(dòng)方向與引物3延伸方向一致，引物2和引物3的5′端需分別添加

XbaⅠ、BamⅠ

XbaⅠ、BamⅠ

序列。拼接形成重組基因的目的是

使頂頭孢霉在低氧的環(huán)境中生長(zhǎng)良好，提高其發(fā)酵產(chǎn)物頭孢菌素C的產(chǎn)量

使頂頭孢霉在低氧的環(huán)境中生長(zhǎng)良好，提高其發(fā)酵產(chǎn)物頭孢菌素C的產(chǎn)量

。
（3）利用含有

潮霉素

潮霉素

的選擇培養(yǎng)基篩選菌種，最后從個(gè)體生物學(xué)水平上鑒定，若

在低氧環(huán)境下，檢測(cè)到頭孢菌素C表達(dá)量增多

在低氧環(huán)境下，檢測(cè)到頭孢菌素C表達(dá)量增多

，則表示轉(zhuǎn)化成功。
（4）為驗(yàn)證轉(zhuǎn)化成功的重組菌株遺傳穩(wěn)定性，可將菌株在

不含

不含

（ 含/不含）潮霉素的液體培養(yǎng)基中連續(xù)轉(zhuǎn)接10代，取第10代菌液采用

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

法接種到

含

含

（ 含/不含）潮霉素的固體培養(yǎng)基上，若能在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，表明重組菌株遺傳穩(wěn)定性良好。